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1、Gadd45a作為p53的靶基因,在細胞的生命過程中有重要作用。調(diào)節(jié)細胞周期、維持基因組穩(wěn)定、DNA修復、細胞衰老及凋亡、維持機體的穩(wěn)定性。已有研究發(fā)現(xiàn),p53及其上下游基因在端粒依賴的衰老過程中起重要作用。然而,對于Gadd45a基因在端粒功能障礙引起的衰老過程中的調(diào)節(jié)作用還不清楚。我們通過雜交,建立Gadd45a和Terc雙基因敲除小鼠品系,進一步互交,建立Gradd45a基因缺失的G3Terc-/-(第三代端粒酶缺失)小鼠品系。在
2、此基礎(chǔ)上,觀察小鼠生存曲線,對小鼠各個組織器官進行稱重,利用組織切片原位染色、競爭性骨髓移植、小腸隱窩體外培養(yǎng)等實驗手段,對Gadd45a在G3Terc-/-小鼠衰老中的作用進行了研究。
實驗結(jié)果顯示Gadd45a敲除能夠延長G3Terc-/-小鼠的壽命。骨髓競爭性移植實驗和干細胞競爭性移植實驗結(jié)果顯示,Gadd45a敲除沒有改善G3Terc-/-小鼠的造血重建能力;小腸石蠟切片PNA探針原位雜交實驗結(jié)果顯示,Gadd45a敲
3、除沒有延長G3Terc-/-小鼠的端粒長度。說明G3Terc-/-小鼠中敲除Gadd45a基因沒有改善造血系統(tǒng)的功能和延長端粒。迸一步對小腸隱窩體外培養(yǎng)實驗顯示,Gadd45a敲除能明顯改善G3Terc-/-小鼠小腸的功能。小腸石蠟切片原位TUNEL染色實驗表明Gadd45a敲除能夠減少G3Terc-/-小鼠小腸隱窩中的凋亡細胞數(shù)目。大腸甲基藍染色,小腸H&E染色實驗以及心臟、肝臟、腎臟稱重實驗說明,Gadd45a敲除從多個組織器官改善
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