胃癌細(xì)胞原代培養(yǎng)及Ming氏浸潤(rùn)型胃癌細(xì)胞系的建立.pdf

1、目的:進(jìn)行胃癌細(xì)胞原代培養(yǎng)，建立Ming氏浸潤(rùn)型胃癌細(xì)胞系。
　　方法:通過(guò)組織塊法和消化法進(jìn)行胃癌原代培養(yǎng)，優(yōu)化細(xì)胞外基質(zhì)、培養(yǎng)基及促生長(zhǎng)物質(zhì)等建立高效的原代培養(yǎng)體系，經(jīng)反復(fù)消化貼壁純化并傳代建立M ing氏浸潤(rùn)型胃癌細(xì)胞系。通過(guò)光鏡和電鏡形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞免疫組化、糖原染色、倍增時(shí)間、核型分析、瓊脂糖克隆實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞特性。
　　結(jié)果:胃癌原代培養(yǎng)膠原酶消化法獲取胃癌細(xì)胞數(shù)量多、純度高；培養(yǎng)皿預(yù)鋪細(xì)胞外基質(zhì)

2、纖連蛋白能促進(jìn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，其效果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.0001）；不同培養(yǎng)基對(duì)原代培養(yǎng)效果不同，除培養(yǎng)基L15與F12間無(wú)差異性外（P>0.05），其他培養(yǎng)基間均存在差異，其中培養(yǎng)基DMEM/F12對(duì)原代培養(yǎng)效果最優(yōu)；不同促生長(zhǎng)物質(zhì)中hEGF和bFGF促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)最明顯，低血清濃度培養(yǎng)基中加入促細(xì)胞生長(zhǎng)物質(zhì)其效果與中-高血清濃度培養(yǎng)基相同（P>0.05）。原代培養(yǎng)經(jīng)純化傳代建立M ing氏浸潤(rùn)型胃癌細(xì)胞系，形態(tài)學(xué)光鏡下多呈梭型和卵圓

3、型，核大深染，核漿比例大，符合癌細(xì)胞特性。透射電鏡下細(xì)胞胞漿量及細(xì)胞器相對(duì)減少，游離核糖體增多，線粒體腫脹明顯。該細(xì)胞系傳代過(guò)程中形態(tài)學(xué)上無(wú)明顯改變。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可疊加團(tuán)塊狀生長(zhǎng)并于低營(yíng)養(yǎng)時(shí)成團(tuán)脫落，營(yíng)養(yǎng)豐富時(shí)重新貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞免疫組化染色角蛋白陽(yáng)性、波形蛋白陰性、K i-67≈75％；糖原染色示細(xì)胞分泌糖原類物質(zhì)；細(xì)胞倍增時(shí)間約47.86小時(shí)；核型三倍體，染色體69條，Y染色體丟失，可見(jiàn)費(fèi)城染色小體；細(xì)胞可在低熔點(diǎn)瓊脂糖中形成克隆，