胃癌細胞原代培養(yǎng)及Ming氏浸潤型胃癌細胞系的建立.pdf

1、目的:進行胃癌細胞原代培養(yǎng)，建立Ming氏浸潤型胃癌細胞系。
　　方法:通過組織塊法和消化法進行胃癌原代培養(yǎng)，優(yōu)化細胞外基質(zhì)、培養(yǎng)基及促生長物質(zhì)等建立高效的原代培養(yǎng)體系，經(jīng)反復(fù)消化貼壁純化并傳代建立M ing氏浸潤型胃癌細胞系。通過光鏡和電鏡形態(tài)學(xué)觀察、細胞免疫組化、糖原染色、倍增時間、核型分析、瓊脂糖克隆實驗、動物體內(nèi)成瘤實驗分析細胞特性。
　　結(jié)果:胃癌原代培養(yǎng)膠原酶消化法獲取胃癌細胞數(shù)量多、純度高；培養(yǎng)皿預(yù)鋪細胞外基質(zhì)

2、纖連蛋白能促進細胞貼壁生長，其效果具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.0001）；不同培養(yǎng)基對原代培養(yǎng)效果不同，除培養(yǎng)基L15與F12間無差異性外（P>0.05），其他培養(yǎng)基間均存在差異，其中培養(yǎng)基DMEM/F12對原代培養(yǎng)效果最優(yōu)；不同促生長物質(zhì)中hEGF和bFGF促進細胞生長最明顯，低血清濃度培養(yǎng)基中加入促細胞生長物質(zhì)其效果與中-高血清濃度培養(yǎng)基相同（P>0.05）。原代培養(yǎng)經(jīng)純化傳代建立M ing氏浸潤型胃癌細胞系，形態(tài)學(xué)光鏡下多呈梭型和卵圓

3、型，核大深染，核漿比例大，符合癌細胞特性。透射電鏡下細胞胞漿量及細胞器相對減少，游離核糖體增多，線粒體腫脹明顯。該細胞系傳代過程中形態(tài)學(xué)上無明顯改變。細胞培養(yǎng)過程中可疊加團塊狀生長并于低營養(yǎng)時成團脫落，營養(yǎng)豐富時重新貼壁生長；細胞免疫組化染色角蛋白陽性、波形蛋白陰性、K i-67≈75％；糖原染色示細胞分泌糖原類物質(zhì)；細胞倍增時間約47.86小時；核型三倍體，染色體69條，Y染色體丟失，可見費城染色小體；細胞可在低熔點瓊脂糖中形成克隆，