靶向EGFR基因miR-7對胃癌細胞系侵襲轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：探討靶向EGFR基因miR-7對胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機制。
　　方法：miRNA微陣列芯片分析胃癌細胞MGC-803（低分化）、MKN-45（低分化）、SGC-7901（中分化）及NCI-N87（高分化）與正常胃黏膜細胞GES-1中miRNA的表達差異。實時定量PCR驗證芯片結(jié)果。生物信息學軟件對相關miRNA進行分析，篩選出miR-7為目的miRNA。將miR-7和miR-NC質(zhì)粒載體分別瞬時轉(zhuǎn)染至MGC-803

2、細胞，倒置熒光顯微鏡和實時定量PCR檢測轉(zhuǎn)染效率。CCK-8法檢測細胞活性， Trans-well小室法和劃痕試驗檢測細胞侵襲遷移能力。實時定量PCR、Western blot分別檢測靶基因mRNA和蛋白表達水平。
　　結(jié)果：miRNA微陣列芯片檢測結(jié)果顯示不同分化程度胃癌細胞較正常胃粘膜細胞均上調(diào)1.5倍的miRNA有miR-21、miR-26b、miR-30b等14種，均下調(diào)1.5倍的miRNA（比值<0.667）有Let-7

3、i、miR-7、miR-622等19種。利用生物信息學篩選出miR-7作為研究對象；實時定量PCR驗證表明，MGC-803、MKN-45比GES-1 miR-7表達下調(diào)兩倍以上。倒置熒光顯微鏡和實時定量PCR檢測結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染miR-7的MGC-803細胞中miR-7表達水平顯著升高。CCK-8檢測結(jié)果顯示，miR-7轉(zhuǎn)染組明顯抑制細胞增殖；Trans-well小室法和劃痕試驗檢測結(jié)果顯示，miR-7轉(zhuǎn)染組的細胞侵襲力和遷移力較轉(zhuǎn)染陰性