冬棗黃酮的提取分離及抗氧化、抑瘤活性研究.pdf

1、冬棗(Zyzyhpu.jujuh.dates)為鼠李科棗屬植物棗樹(Zyzyhpu.jujub.Mill)的果實，原產(chǎn)于我國渤海地區(qū)、黃河三角洲腹地，現(xiàn)在山東、河北等地大面積種植，是我國特有的一種鮮食果品。冬棗營養(yǎng)價值很高，富含各種維生素、黃酮類、環(huán)腺苷酸等。冬棗季節(jié)性很強，皮薄、水分含量高，不易保存。多項流行病學研究結果表明，蔬菜和水果的攝入量與心血管疾病、癌癥等慢性疾病的發(fā)生率呈負相關。水果和蔬菜中的植物化學物質(zhì)尤其是黃酮類作為主要

2、的生物活性物質(zhì)，在保護機體健康方面起著重要的作用。黃酮類物質(zhì)廣泛存在于水果、蔬菜、茶葉等各類植物之中，具有較強的抗氧化、抗過敏、消炎、抑菌、抑制腫瘤生長等作用。越來越多的證據(jù)表明，低濃度的黃酮或2-羥基黃酮可以改善阿霉素的療效。黃烷酮和2-羥基黃酮可能具有抑制體內(nèi)肺腫瘤發(fā)展的作用，而沒有任何明顯的毒性跡象。冬棗富含黃酮類物質(zhì)，實驗室研究顯示冬棗黃酮提取物具有很強的抗氧化活性，可以減少脂質(zhì)過氧化，但迄今為止鮮見有關的冬棗活性的研究。本研究

3、在提取分離、純化冬棗黃酮的基礎上，采用模擬體系觀察了冬棗黃酮的抗氧化活性及作用機理；并通過對荷瘤小鼠補充不同劑量冬棗黃酮提取物，觀察其抑瘤作用，并探討其可能的作用機制，為腫瘤的營養(yǎng)干預和開發(fā)利用冬棗資源提供理論指導。1.以總抗氧化活性作為冬棗黃酮提取效果的指標，以乙醇為提取劑，通過加熱振蕩提取法、超聲波輔助提取法以及微波輔助提取法的單因素實驗，分別篩選出影響三種提取法提取效率的主要因素，并采用正交試驗法優(yōu)化出三種提取法的最佳提取條件，通

4、過比較三種方法的提取效率優(yōu)化出冬棗黃酮的提取工藝。優(yōu)化的總黃酮提取工藝為：萃取時間20s×9（每次提取20s，共提取9次），微波功率468W，乙醇濃度75％，料液比1：20。在此條件下，總黃酮的提取率為1.46％。2.用5種國產(chǎn)大孔樹脂對冬棗黃酮進行了靜態(tài)吸附與解析試驗。結果表明，X-5型樹脂最適于純化冬棗黃酮。通過動態(tài)吸附試驗確定了X-5型樹脂純化冬棗黃酮的最佳工藝為：先用2倍柱體積的50％乙醇液洗脫、再用1.5倍柱體積的70％乙醇液

5、進行梯度洗脫，洗脫率達到82.42％。3.冬棗黃酮乙醇萃取物(ECF)，乙酸乙酯萃取物(ETF)、正丁醇萃取物(BAF)和萃余水溶物(WF)對DPPH、O2-和·OH均具有一定的清除作用，且在一定濃度范圍內(nèi)呈良好的量效關系。ECF、ETF和WF均能有效的抑制Fe2+誘導的大豆磷脂模擬膜脂質(zhì)體過氧化，減少丙二醛的生成：且均能有效地推遲Cu2+誘導的血清脂蛋白氧化修飾的啟動時間，抑制脂蛋白的氧化進程，在一定濃度范圍內(nèi)呈良好的量效關系。4.D

6、JF可有效抑制H2O2誘導的大鼠血淋巴細胞DNA、VECs氧化損傷，有助于維持細胞的正常結構和功能；DJF可有效抑制Fe2+.H2O2誘導的小鼠肝組織MDA的生成，提高GSH-Px、Na+.K+.ATPase、Ca2+-Mg+-ATPase的活力；降低肝線粒體的腫脹度；降低H2O2誘導的小鼠RBC溶血。劑量-效應關系較明顯。5.DJF對小鼠S180移植瘤的生長有一定的抑制作用，在100-40.mg/Kg·d劑量范圍內(nèi)，抑瘤率為20.15

7、％-30.01％。DJF可促進荷瘤小鼠腫瘤組織凋亡促進基因Bax的表達，同時減少凋亡抑制基因Bcl-2的表達，升高Bax與Bcl-2的比值，促進腫瘤細胞凋亡。與荷瘤對照組比較，DJF能顯著提高荷瘤小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)，增加小鼠脾淋巴細胞的增殖率，升高小鼠血漿IL-2含量。6.體內(nèi)安全性.LD50)實驗結果表明，DJF組動物經(jīng)14天觀察未見任何中毒癥狀、無死亡、不伴有降低體重或其他毒副作用。LD50>5000mg/kg，屬實際無毒級。研