紅花黃色素對人肝癌MHCC-97H細胞周期、凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表達的影響.pdf

1、目的：近年來由于腫瘤發(fā)病率的不斷上升，中藥在抗癌的輔助治療方面也發(fā)揮著一定作用。紅花為菊科植物紅花(Carthamus tinctorius L.)的筒狀花冠，辛、溫，入心、肝經(jīng)，有活血通經(jīng)、祛瘀止痛功效，在中醫(yī)臨床也常用于抗癌復(fù)方中。紅花成分多而雜，大量研究顯示紅花黃色素(saffloryellow,SY)是其發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，目前對SY研究較多的是在心血管方面，而在腫瘤方面的研究相對較少。肝癌是我國消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一

2、，乙肝病毒感染與肝癌的發(fā)生發(fā)展存在一定的相關(guān)性。人肝癌細胞株MHCC-97H是乙肝表面抗原和甲胎蛋白表達均陽性，并有高轉(zhuǎn)移潛能的細胞系，適合于SY對乙肝病毒感染相關(guān)性肝癌的研究。本實驗通過研究不同濃度SY對MHCC-97H細胞周期、凋亡和蛋白Bax、Bcl-2表達的影響，以期為相關(guān)的理論研究及應(yīng)用于臨床抗腫瘤的輔助治療提供參考。
　　方法：選用對數(shù)生長期MHCC-97H細胞進行實驗。加入不同濃度SY（0、0.03125、0.062

3、5、0.125、0.25、0.5mg/L）含藥培養(yǎng)液進行體外培養(yǎng)，并設(shè)順鉑陽性對照組（干預(yù)終濃度0.5μg/ml）；分別干預(yù)24h、48h及72h，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，采用四甲基偶氮唑藍（MTT）法觀察SY對細胞增殖的抑制作用；不同濃度SY干預(yù)48h，流式細胞儀（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）觀察細胞周期及凋亡率的變化，Western-blotting（WB）檢測蛋白Bax、Bcl-2表達情況。
　　結(jié)果：⑴細胞形

4、態(tài)學(xué)：倒置顯微鏡下，空白組MHCC-97H細胞貼壁良好，胞漿豐富，呈多邊形，相鄰細胞生長融合成片；實驗組細胞加入不同濃度SY干預(yù)后，細胞形態(tài)變化明顯，細胞變得稀疏雜亂、折光性增強，培養(yǎng)基中漂浮的細胞增多。⑵MTT法檢測結(jié)果：與空白組比較，不同濃度SY對MHCC-97H細胞增殖具有一定的抑制作用（P<0.01），隨SY濃度增加及作用時間延長抑制率有升高趨勢，呈一定時間及濃度依賴性；0.5mg/L濃度干預(yù)72h抑制率最高（40.5％），與順

5、鉑陽性對照組比較（45.1%）稍遜（P<0.05）。⑶FCM檢測結(jié)果：與空白組比較，不同濃度SY干預(yù)48h，MHCC-97H細胞的凋亡有一定變化（P<0.05）；0.03125mg/L~0.5mg/L總凋亡率分別為：19.62%、22.29%、26.71%、28.51%、34.58%，有一定的濃度相關(guān)性；凋亡率變化0.5mg/L濃度最明顯（34.58%），與順鉑對照組（46.05%）比較，兩者存在一定的差距。SY對MHCC-97H細胞的

6、周期G1、S及G2期的阻滯作用與空白組比較無明顯差異（P﹥0.05），與空白組比較，順鉑對照組對細胞周期有明顯阻滯作用（P<0.01），細胞主要被阻滯在G2/M期。⑷WB檢測結(jié)果：SY作用MHCC-97H細胞48h，隨著SY濃度的增加（0.0625mg/L~0.5mg/L），Bax表達增加，Bcl-2表達減少，Bcl-2/bax比值下降，有一定濃度依賴性，與空白組比較差異顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：①SY作用下MH