子癇前期外周血CD3-CD16+CD56+NK細(xì)胞水平變化研究.pdf

1、目的：
　　 子癇前期（preeclampsia）是嚴(yán)重威脅母兒健康的妊娠期特有疾病，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒死亡的主要原因之一。由于其發(fā)病機(jī)制至今尚不明確，嚴(yán)重影響了有效防治。近幾年來(lái)由于分子免疫學(xué)的飛速發(fā)展，子癇前期被認(rèn)為與炎癥、血管內(nèi)皮功能障礙，母胎間的免疫不耐受密切相關(guān)，從而引起免疫損傷、滋養(yǎng)細(xì)胞缺血及胎盤植入異常，引起全身不同程度的血管內(nèi)皮損傷和嚴(yán)重的全身性炎癥反應(yīng)，彌漫性內(nèi)皮細(xì)胞損傷被認(rèn)為是子癇前期發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。

2、>　　 自然殺傷細(xì)胞（natural-killer cell，NK）不依賴于抗原刺激，能自發(fā)地溶解多種腫瘤細(xì)胞和被病毒感染細(xì)胞，稱為自然殺傷細(xì)胞，主要存在于外周血和脾臟中，在人外周血中占淋巴細(xì)胞的5％-15％，是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞。人類NK細(xì)胞組的分化抗原有CD16，CD56，CD57，CD69，CD94，CD96等，其中具有代表性的表型為CD3-CD56+CD16+。
　　 本試驗(yàn)將應(yīng)用流式細(xì)胞分析技術(shù)，檢測(cè)晚孕子癇前期婦女

3、外周血NK細(xì)胞CD3-CD16+CD56+變化，并與同期正常晚期妊娠婦女，健康育齡未孕婦女為對(duì)照。初步探討NK細(xì)胞在子癇前期發(fā)病中的變化，以期探討子癇前期的發(fā)病機(jī)制，從而為尋找防治措施提供新的思路。
　　 方法：
　　 一、標(biāo)本來(lái)源
　　 選取2010年1月至2010年3月在盛京醫(yī)院產(chǎn)科住院的孕婦為研究對(duì)象。子癇前期患者27例，年齡26.3±1.8歲，孕周為36.2±1.5周，其中輕度子癇前期者8例，重度子癇前期

4、者19例。子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)樂(lè)杰主編全國(guó)統(tǒng)編本科教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第七版的診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)。正常晚孕婦女15例為對(duì)照組，年齡28.3±1.5歲，孕周為36.4±1.3周。同時(shí)選擇健康育齡未孕婦女15例作為對(duì)照組，年齡為24.9±1.6歲。以上兩組妊娠組均為單胎妊娠，既往無(wú)特殊疾病史，無(wú)其他妊娠合并癥，未服用免疫抑制或增強(qiáng)藥物，組間一般情況比較無(wú)差異性。
　　 二、流式法檢測(cè)NK細(xì)胞
　　 各組婦女空腹采取肘靜脈血3ml，

5、每份標(biāo)本設(shè)兩個(gè)試管，實(shí)驗(yàn)管及陰性對(duì)照管。每份標(biāo)本各取50μl抗凝全血分別加入2個(gè)試管中，依次在實(shí)驗(yàn)管中加入抗CD3-FITC/CD16CD56-PE 15μl。加樣完畢后，震蕩混勻，避光靜置15分鐘。加入溶血?jiǎng)?50μl，震蕩混勻，避光靜置15分鐘。各試管中依次加入1m1PBS，放入自動(dòng)平衡離心機(jī)中，15℃轉(zhuǎn)速設(shè)定1500轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。待離心完畢，快速傾倒上清，并且管口朝下，用衛(wèi)生紙將管口的殘留液體吸干，僅保留管底的沉淀物。各試

6、管中依次加入溶血素400μl，吹打重懸，上機(jī)檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 子癇前期組母血CD3-CD16+CD56+NK細(xì)胞所占比例為15.51％±2.49％，明顯高于正常晚孕組9.97％±1.41％和健康育齡未孕組11.11％±1.48％，有顯著性差異（P均<0.01）。正常晚孕組母血CD3-CD16+CD56+NK細(xì)胞百分比低于健康育齡未孕組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 子