紅麻素抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用及誘導(dǎo)免疫耐受機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究紅活麻單體雙香豆素類化合物紅麻素抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用；觀察紅麻素在Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型（CIA）中的抗自身免疫性關(guān)節(jié)炎的作用；分別用Elisa法測(cè)血清細(xì)胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-2與IL-10的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樹突狀細(xì)胞DC表型及轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達(dá)的變化，檢測(cè)藥物對(duì)CD25+CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化影響等方法來探討紅麻素抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制；通過觀察紅麻素對(duì)體內(nèi)臟器的影響，體外對(duì)肝癌He

2、pG2細(xì)胞增殖的作用來探討紅麻素細(xì)胞毒性。
　　 方法：（1）在BALB/c 小鼠體內(nèi)建立Ⅱ型膠原所致關(guān)節(jié)炎模型，將小鼠分為紅麻素高、中、低劑量組，MTX 陽性對(duì)照組，CIA模型組，空白對(duì)照組。治療組在造模后第21天按60mg/kg、40mg/kg、20mg/kg的劑量，每日灌胃給藥，連續(xù)3周，利用體重變化、關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、脾臟指數(shù)等指標(biāo)以及組織病理學(xué)檢查觀察紅麻素對(duì)關(guān)節(jié)炎發(fā)病和關(guān)節(jié)損傷的影響，驗(yàn)證紅麻素治療RA的作用。

3、
　　 （2）利用Elisa 法檢測(cè)紅麻素對(duì)小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、TGF-β和IL-10分泌的影響;通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)紅麻素對(duì)骨髓來源樹突狀細(xì)胞（DC）的表型、轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達(dá)水平變化以及細(xì)胞因子IL-12p70分泌的影響；檢測(cè)給藥后小鼠體內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的變化，探討紅麻素治療類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理。
　　 （3）觀察給藥后小鼠臟器的變化，利用MTT 法檢測(cè)其對(duì)H

4、epG2 肝癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響。
　　 結(jié)果：紅麻素治療組表現(xiàn)出對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的抑制作用,關(guān)節(jié)炎評(píng)分和關(guān)節(jié)腫脹度與CIA模型組相比較輕，且呈劑量依賴趨勢(shì)停藥一周后效果仍然明顯。病理分析顯示經(jīng)過紅麻素治療的小鼠，關(guān)節(jié)炎性浸潤(rùn)程度比CIA模型組輕，這種保護(hù)的狀態(tài)伴隨著血清中的IFN-γ、IL-2分泌水平的降低和IL-10、TGF-β分泌水平的升高。經(jīng)過紅麻素處理的DC表面低表達(dá)MHCⅡ和CD86 共刺激分子，I

5、L-12p70的分泌減少，并且DC中的轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達(dá)受到抑制。紅麻素治療組小鼠體內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的分化水平增高。測(cè)量動(dòng)物各內(nèi)臟指數(shù)顯示給藥組與正常組臟器指數(shù)相近，沒有明顯差異，體外肝癌細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)紅麻素對(duì)肝癌細(xì)胞沒有抑制作用。
　　 結(jié)論：（1）實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紅活麻單體紅麻素具有抗小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，可以減輕關(guān)節(jié)炎小鼠的發(fā)病及延緩病情，且給藥后預(yù)后效果良好。
　　 （2）紅麻素可能從