羅格列酮對肝星狀細胞生物學特性的影響及其作用機制淺析.pdf

1、目的：觀察羅格列酮對體外培養(yǎng)肝星狀細胞（HSC）增殖、凋亡、細胞周期及超微結構的影響；觀察羅格列酮對普通培養(yǎng)的HSC和經肝癌條件培養(yǎng)基作用后的HSC表達a-SMA、PDGF-B的影響，初步探討羅格列酮影響HSC生物學特性的作用機制。
　　 方法：⑴MTT檢測不同濃度羅格列酮（0、10、12.5、15、17.5、20μmol/L）無血清培養(yǎng)基對HSC增殖的影響。⑵流式細胞儀（FCM）檢測不同濃度羅格列酮（0、10、12.5、15、

2、17.5、20μmol/L）無血清培養(yǎng)基對HSC細胞周期和凋亡率的影響。⑶電鏡（TEM）觀察15μmol/L的羅格列酮無血清培養(yǎng)基對HSC 超微結構的影響。⑷免疫組化（IHC）半定量檢測：1）不同濃度羅格列酮（濃度組別與前者相同）無血清培養(yǎng)基對HSC表達a-SMA、PDGF-B的影響；2）HSC 經24h 肝癌細胞（HCC）條件培養(yǎng)基（按1∶1、1∶2的比例稀釋）處理，再用15μmol/L 羅格列酮作用于HSC（另設空白對照組、單純羅格

3、列酮組和單純24h 肝癌細胞條件培養(yǎng)基組），觀察HSC的a-SMA、PDGF-B表達變化。上述免疫組化結果用計算機圖像分析技術進行半定量分析。
　　 結果：①MTT結果顯示：羅格列酮對HSC的增殖具有抑制作用，抑制率隨著羅格列酮濃度的增加而增加，兩者呈量效依賴關系。②FCM結果顯示：經不同濃度羅格列酮作用后，HSC的凋亡率、G0/G1 期細胞比例均隨著濃度的增加而增加，各濃度組凋亡率的增加均具有非常顯著意義（P＜0.01），羅格

4、列酮濃度高于15μmol/L時，G0/G1 期細胞比例增加具有顯著意義（P＜0.05）。③透射電鏡觀察，經羅格列酮作用后，HSC的生長狀態(tài)受到抑制，部分細胞呈現凋亡相關的超微結構改變，如細胞體積變小，表面絨毛結構減少或消失，核染色質凝集并邊集，核固縮，并可見凋亡小體。④免疫組化結果顯示：羅格列酮作用于HSC后，其a-SMA、PDGF-B的表達水平隨羅格列酮濃度的增加而減少，且兩者的表達具有緊密相關性（r=0.971）；羅格列酮作用于經肝