microRNA-194模擬物對成骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607生物學(xué)特性的影響.pdf

1、背景:MiroRNAs（miRNAs）是一類廣泛存在于植物、動物以及病毒等真核細(xì)胞生物中不編碼蛋白質(zhì)的內(nèi)源性單鏈小分子RNA，長約21-25nt。miRNA與靶mRNA的3′UTR堿基配對，通過抑制靶mRNA的翻譯或使其直接降解，使靶基因在轉(zhuǎn)錄后水平沉默，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。miRNA參與了動物、植物許多復(fù)雜的生命過程，如生長發(fā)育、器官形成、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等。有研究表明，miRNAs表達(dá)異常與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，關(guān)于腫瘤的

2、診斷和治療的研究也有望從miRNAs中找到新的突破口。
　　骨肉瘤是我國發(fā)病率最高的原發(fā)惡性骨腫瘤，青少年高發(fā)，轉(zhuǎn)移早，約一半的骨肉瘤患者發(fā)病時就已出現(xiàn)肺部轉(zhuǎn)移，當(dāng)前，影響骨肉瘤患者治療效果，甚至導(dǎo)致患者死亡的首要因素就是骨肉瘤的轉(zhuǎn)移。在本實(shí)驗(yàn)室建立了人骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607后，利用已有的SOSP-9607細(xì)胞系克隆篩選出了兩種亞細(xì)胞系：F5、F4，前一種細(xì)胞為高增殖轉(zhuǎn)移率細(xì)胞系，后一種細(xì)胞為低增殖轉(zhuǎn)移率細(xì)胞系，分別具有不

3、同的增殖轉(zhuǎn)移能力。應(yīng)用基因芯片技術(shù)對兩種細(xì)胞分別進(jìn)行了差異miRNA分析后，發(fā)現(xiàn)了一些差異表達(dá)的miRNA。miR-194是在高增殖轉(zhuǎn)移率細(xì)胞系F5中高表達(dá)的眾多miRNA分子之一（約4倍）。本實(shí)驗(yàn)以miR-194為目標(biāo)，研究miR-194的在骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607細(xì)胞中的生物學(xué)功能變化，為進(jìn)一步研究其作用機(jī)制，為其在骨肉瘤預(yù)后判斷和治療等方面的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　目的:觀察miR-194模擬物對于成骨肉瘤細(xì)胞系S

4、OSP_9607細(xì)胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移能力的影響。
　　方法:
　?。?）將SOSP_9607細(xì)胞分為對照組和實(shí)驗(yàn)組,對照組分為陰性對照和正常細(xì)胞對照組。實(shí)驗(yàn)組采用miR-194模擬物（hsa-miR-194mimics）轉(zhuǎn)染成骨肉瘤細(xì)胞系SOSP_9607，增強(qiáng)SOSP_9607細(xì)胞內(nèi)miR-194的活性。
　?。?）四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法繪制三組細(xì)胞生長曲線。
　　（3）流式細(xì)胞儀測定SOSP-

5、9607細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-194模擬物后實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞凋亡的變化。流式細(xì)胞儀測定SOSP-9607細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-194模擬物后實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞周期的變化。
　?。?）通過transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及遷移實(shí)驗(yàn)評估SOSP-9607細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-194模擬物后實(shí)驗(yàn)組與對照組的轉(zhuǎn)移能力的變化。
　　結(jié)果:（1）MTT法檢測顯示，與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖能力明顯下降。（P<0.01）（2）流式細(xì)胞儀測定SOSP-960

6、7細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-194模擬物后實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞凋亡率，陰性對照組凋亡率（3.3±0.19）％，實(shí)驗(yàn)組凋亡率（10.1±0.22）％，兩者相比實(shí)驗(yàn)組凋亡率明顯增高(P<0.01)。流式細(xì)胞儀檢測周期顯示，SOSP-9607細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-194模擬物后實(shí)驗(yàn)組相比對照組細(xì)胞G0/G1細(xì)胞比例顯著增加,S期細(xì)胞與G2/M期細(xì)胞比例顯著減少(P<0.01)。（3）Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的侵襲和遷移