普安銀鯽早期發(fā)育過(guò)程中脂質(zhì)代謝關(guān)鍵酶研究.pdf

1、魚(yú)類的早期發(fā)育，同其它卵生動(dòng)物一樣，是分解利用卵黃中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，形成新生命的組織、器官的過(guò)程。卵黃物質(zhì)主要由蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和碳水化合物組成。脂質(zhì)作為卵黃物質(zhì)的主要營(yíng)養(yǎng)成分之一，一方面，脂質(zhì)可為魚(yú)類早期發(fā)育提供能量和必需脂肪酸，另一方面，脂質(zhì)也是生物膜等組織的組成部分。本研究在本實(shí)驗(yàn)室已對(duì)普安銀鯽（Carassius auratus gibelio）胚胎發(fā)育、仔稚魚(yú)生長(zhǎng)特性和胚胎期脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)等的研究基礎(chǔ)上，采用酶學(xué)方法和熒光定量PCR方法對(duì)普

2、安銀鯽早期發(fā)育過(guò)程中脂質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性變化及其mRNA表達(dá)量進(jìn)行了研究，并探究葡萄糖和維生素C分別對(duì)普安銀鯽早期發(fā)育、脂質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性和mRNA表達(dá)量的影響。同時(shí)采用組織學(xué)方法研究了早期發(fā)育過(guò)程中消化系統(tǒng)組織學(xué)的變化特點(diǎn)，并探討了消化系統(tǒng)的發(fā)育與脂質(zhì)代謝酶活性與mRNA表達(dá)量之間的關(guān)系，旨在為魚(yú)類的早期發(fā)育過(guò)程中脂肪代謝規(guī)律提供參考資料。主要研究結(jié)果如下：
　　1、在（24±0.5）℃水溫條件下，通過(guò)設(shè)置不同濃度的葡萄糖溶液和維

3、生素C溶液分別添加到普安銀鯽的孵化水體中，直至卵黃囊完全消失。葡萄糖濃度為0、5、10、15和20 g/L；維生素C濃度為0、20、25、30和35 mg/L，記錄孵化時(shí)間、孵化率及仔魚(yú)成活率，結(jié)果顯示：
　　①葡萄糖溶液濃度低于15 g/L，仔魚(yú)出膜時(shí)間隨著葡萄糖濃度的增加而縮短，孵化率、成活率、體質(zhì)量和全長(zhǎng)則升高；葡萄糖溶液濃度高于15 g/L對(duì)普安銀鯽的早期發(fā)育表現(xiàn)出抑制作用。
　?、诰S生素C溶液濃度低于30 mg/L

4、時(shí)，仔魚(yú)出膜時(shí)間隨著維生素C濃度的增加而降低，孵化率、成活率、體質(zhì)量和全長(zhǎng)則升高。維生素C的濃度高于30 mg/L對(duì)普安銀鯽的早期發(fā)育表現(xiàn)出抑制作用。
　?、?5 g/L葡萄糖溶液、30 mg/L維生素C溶液能促進(jìn)普安銀鯽的早期發(fā)育。
　　2、采用酶學(xué)方法研究了普安銀鯽早期發(fā)育中乙酰輔酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase，ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）、脂蛋白脂酶

5、(lipoprotein lipase， LPL)、肝脂酶(hepatic lipase， HL)和肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I（carnitine palmitoyltransferases I，CPTⅠ）活性變化特點(diǎn)及15 g/L葡萄糖和30 mg/L維生素C分別對(duì)這5種酶活性的影響。結(jié)果顯示：
　?、僭诔墒炻阎幸丫哂蠪AS、ACC、LPL、HL和CPTⅠ活性；早期發(fā)育中5種酶活性均比成熟卵中高，且5種酶活性在早期發(fā)育中總體呈上升趨勢(shì)

6、，在原腸期時(shí)酶活性出現(xiàn)一個(gè)顯著升高點(diǎn)。
　?、?5 g/L葡萄糖溶液和30 mg/L維生素C溶液分別浸泡均對(duì)普安銀鯽早期發(fā)育中FAS、ACC、LPL、HL和CPTⅠ的活性有促進(jìn)作用。
　　3、采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)ACCα、FAS、LPL和HL基因在普安銀鯽早期發(fā)育中mRNA的表達(dá)水平，并檢測(cè)了15 g/L葡萄糖和30 mg/L維生素C浸浴普安銀鯽后對(duì)這四種基因mRNA表達(dá)量的影響。結(jié)果顯示：
　?、貯CCα、FA

7、S、LPL和HL基因在成熟卵中已經(jīng)開(kāi)始表達(dá)，隨早期發(fā)育的進(jìn)行4種基因的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，在原腸期mRNA表達(dá)量出現(xiàn)一個(gè)顯著升高點(diǎn)。
　?、?5 g/L葡萄糖溶液和30 mg/L維生素C溶液分別浸泡均能誘導(dǎo)普安銀鯽早期發(fā)育中ACCα、FAS、LPL和HL基因mRNA的表達(dá)。
　　4、利用形態(tài)學(xué)和組織切片的方法，對(duì)普安銀鯽卵黃囊仔魚(yú)發(fā)育過(guò)程中消化系統(tǒng)的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了描述，并探究了普安銀鯽早期發(fā)育中ACCα、FAS、LPL和

8、HL活性以及mRNA的表達(dá)與消化系統(tǒng)發(fā)生發(fā)育的關(guān)系。結(jié)果顯示：
　　①隨著魚(yú)體的生長(zhǎng)，仔魚(yú)消化系統(tǒng)在結(jié)構(gòu)和功能上不斷完善成熟。1-2日齡為內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)階段，卵黃囊較大。初孵仔魚(yú)消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，依靠吸收腹部卵黃囊內(nèi)的卵黃來(lái)維持生命和器官發(fā)育，2日齡仔魚(yú)消化道基本貫通，但未開(kāi)始攝食。3-4日齡為混合營(yíng)養(yǎng)階段，卵黃囊逐漸被吸收，消化系統(tǒng)明顯分化成食道、腸和肝臟等。5日齡以后仔魚(yú)進(jìn)入外源性營(yíng)養(yǎng)階段，仔魚(yú)消化管加粗，腸內(nèi)有食物殘留。