家雞胚胎早期發(fā)育過(guò)程中DNA甲基化的MSAP分析.pdf

1、表觀遺傳學(xué)即沒(méi)有DNA序列變化的、可遺傳的基因表達(dá)改變。DNA甲基化即為表觀遺傳中的一個(gè)重要組成部分?，F(xiàn)有研究表明，DNA甲基化水平在胚胎發(fā)育中存在一個(gè)變化過(guò)程，并且會(huì)影響如性狀分化等胚胎發(fā)育過(guò)程中的重要進(jìn)程。通過(guò)MSAP（甲基敏感擴(kuò)增片段多態(tài)性 methylation sensitive amplified polymorphism）技術(shù)分析家雞胚胎發(fā)育過(guò)程中的甲基化位點(diǎn)變化，首先能夠?qū)⑦@一方法應(yīng)用于家禽胚胎發(fā)育分析，得到表觀遺傳學(xué)變

2、化的重要信息，其次，能首次得到家雞胚胎的基因組甲基化程度變化趨勢(shì)以及不同組織器官間甲基化程度差異等數(shù)據(jù)。通過(guò)這一過(guò)程，可以揭示家雞胚胎發(fā)育過(guò)程中DNA甲基化的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律和器官發(fā)育變化間可能存在的關(guān)系，為進(jìn)一步研究影響經(jīng)濟(jì)性狀的DNA甲基化變化或者其他表觀修飾打下基礎(chǔ)。 本研究以不同時(shí)間段的家雞胚胎為試驗(yàn)材料，提取基因組DNA，采用MSAP對(duì)其甲基化水平進(jìn)行了初步檢測(cè)：共計(jì)發(fā)現(xiàn)甲基化位點(diǎn)880個(gè)，不存在單鏈外側(cè)和雙鏈內(nèi)測(cè)甲基化位

3、點(diǎn)1332個(gè)。結(jié)果顯示CCGG位點(diǎn)單鏈外側(cè)的胞嘧啶甲基化位點(diǎn)比例為20.48％，雙鏈CCGG位點(diǎn)的內(nèi)側(cè)胞嘧啶甲基化19.30％，兩者總比例為39.78％，其中3天時(shí)期甲基化比例為32.96％，7天時(shí)期甲基化比例為38.48％，12天時(shí)期甲基化比例為39.45％，15天時(shí)期甲基化比例為47.73％?？梢钥闯觯摷谆兓请S著胚胎發(fā)育而呈升高趨勢(shì)。 本研究以15天不同組織器官的家雞胚胎為試驗(yàn)材料，提取基因組DNA，采用甲基敏感擴(kuò)增

4、片段多態(tài)性對(duì)其甲基化水平進(jìn)行了初步檢測(cè)：共計(jì)發(fā)現(xiàn)甲基化位點(diǎn)1379個(gè)，不存在單鏈外側(cè)和雙鏈內(nèi)測(cè)甲基化位點(diǎn)1553個(gè)。結(jié)果初步顯示CCGG位點(diǎn)單鏈外側(cè)的胞嘧啶甲基化位點(diǎn)比例為23.67％，雙鏈CCGG位點(diǎn)的內(nèi)側(cè)胞嘧啶甲基化23.36％，兩者總比例為47.03％。其中胸肌組織甲基化比例為47.73％，心臟組織甲基化比例為42.74％，肺臟組織甲基化比例為39.45％，腎臟組織甲基化比例為46.64％，肝臟組織甲基化比例為52.48％。可以看

5、出，肝臟組織甲基化比例較高而肺臟較低，其它較為接近。 總體來(lái)說(shuō)，家雞胚胎甲基化程度隨時(shí)間發(fā)育呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)：其中從12天到15天日齡時(shí)甲基化變化程度比較高，而在5到12天期間是甲基化程度變化不明顯。同時(shí)，家雞胚胎甲基化呈現(xiàn)較高的組織特異性差異，其中肝臟部分甲基化程度較高，肺臟組織較低，其它部分則較為接近。胚胎甲基化的時(shí)間線變化和胚胎體重增加相符，胚胎甲基化的組織特異性變化也符合胚胎的器官發(fā)育的動(dòng)態(tài)過(guò)程。并且也證實(shí)甲基化高峰期很可能