普安銀鯽早期發(fā)育中抗氧化能力及Tf基因的表達(dá).pdf

1、本研究以普安銀鯽為研究對象，旨綜合發(fā)育生物學(xué)、組織學(xué)、酶學(xué)和分子生物學(xué)的研究方法探究了普安銀鯽早期發(fā)育過程中抗氧化能力強(qiáng)弱和維生素C對其影響，并研究了Tf基因在普安銀鯽早期發(fā)育過程中的表達(dá)特點(diǎn)及維生素C對其表達(dá)量的影響。結(jié)果表明：
　　1、通過將不同濃度的維生素C添加到普安銀鯽的孵化水體中，研究了維生素C溶液浸泡對普安銀鯽出膜時(shí)間、孵化率、成活率及卵黃囊仔魚生長的影響。結(jié)果顯示：維生素C溶液濃度低于30 mg/L時(shí)，仔魚出膜時(shí)間隨

2、著維生素C濃度的增加而降低，孵化率、成活率、體質(zhì)量和全長則升高。維生素C的濃度高于30 mg/L對普安銀鯽的早期發(fā)育表現(xiàn)出抑制作用。研究表明適宜濃度的維生素C添加到普安銀鯽的孵化水體中能促進(jìn)其早期發(fā)育。
　　2、采用生化的方法測定了正常發(fā)育組（0mg/L）和30 mg/L維生素C組普安銀鯽早期發(fā)育過程中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性。結(jié)果顯示：（1）SOD、CAT和GSH-

3、Px在成熟卵中具有活性，分別為（10.213±0.458)U/mg、（8.701±0.371）U/mg和（55.485±4.896） U/mg，屬母源性抗氧化酶；（2）在正常組中，SOD活性逐漸升高，而過氧化氫酶的活性呈“升高-降低-升高”的趨勢，在心跳期降到最低，為（6.175±0.532） U/mg，隨后其活性開始顯著（P<0.05）上升；而GSH-Px活性則呈“升高-降低”的變化；（3）30 mg/L的維生素C組中，SOD、CAT

4、和GSH-Px活性總體上高于對照組，心跳期后顯著高于對照組（P<0.05）。結(jié)果表明:母源性抗氧化酶在普安銀鯽胚胎發(fā)育的早期發(fā)揮著重要作用；適宜濃度的維生素C添加到普安銀鯽的孵化水體中能提高胚胎及仔魚的抗氧化能力。
　　3、采用生化方法測定了正常發(fā)育組（0 mg/L）和30 mg/L維生素C組普安銀鯽早期發(fā)育過程中乳酸脫氫酶（LDH）活性、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）和蛋白質(zhì)羰基（PCA）的含量。結(jié)果顯示：（1）普

5、安銀鯽早期發(fā)育過程中MDA、PCA含量及LDH活性均呈“升高-降低”的趨勢，均在原腸中期達(dá)到最高，T-AOC則逐漸增加；（2）30 mg/L的維生素C組中MDA、PCA含量及LDH的活性顯著低于對照組（P<0.05），T-AOC顯著高于對照組（P<0.05）。結(jié)果表明，（1）普安銀鯽胚胎期受到的氧化損傷比胚后嚴(yán)重；（2）適宜濃度的維生素C能提高胚胎及仔魚的抗氧化能力，有效降低胚胎及仔魚受到的氧化損傷，提高其孵化率及存活率。
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6、、采用RT-PCR與熒光定量PCR技術(shù)研究了正常發(fā)育組（0mg/L）和30 mg/L維生素C組普安銀鯽早期發(fā)育中轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferring,Tf)的基因表達(dá)。結(jié)果表明：在成熟卵，受精卵和囊胚晚期中Tf基因均未表達(dá)，發(fā)育至原腸中期開始表達(dá)，之后成“升高-降低-升高”的變化趨勢，在心跳期達(dá)到最高峰，出膜前期最低；在30 mg/L的維生素C處理組中，胚胎期Tf基因的表達(dá)量低于正常組，而出膜以后則高于正常組；Tf在胚胎期的功能是獨(dú)立于其

7、結(jié)合鐵之外的功能，而維生素C的添加降低了Tf在胚胎期參與免疫等方面的功能，增強(qiáng)了其在仔魚中運(yùn)輸和轉(zhuǎn)運(yùn)鐵離子的功能。
　　5、利用形態(tài)學(xué)和組織切片的方法，對普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育進(jìn)行了光鏡觀察，描述了普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明：普安銀鯽的心臟起源于原腸晚期的中胚層；受精28h后，心臟開始跳動，此時(shí)心臟呈短管狀，位于頭部的前下方，心跳頻率約40-50次/min，紅細(xì)胞開始出現(xiàn)；出膜3日時(shí)，鰓絲開始出現(xiàn)，隨著發(fā)育的進(jìn)