TLR4信號參與丙泊酚預(yù)處理對缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：1.研究Toll樣受體4(TLR4)信號是否參與人胃黏膜上皮(GES-1)細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷過程；2.TLR4信號通路是否參與丙泊酚對這種損傷的保護(hù)作用。
　　方法：GES-1細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10％胎牛血清，青霉素，鏈霉素，Hepes及NaHCO3的DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為37℃，95% O2和5%CO2。實(shí)驗(yàn)前24h，將完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基)換為維持培養(yǎng)基(含1%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基)使細(xì)胞

2、同步化。實(shí)驗(yàn)分為四組：正常組(N)：細(xì)胞置于常氧條件下培養(yǎng)；缺氧/復(fù)氧組(H/R)：缺氧前加入無糖培養(yǎng)基RPMI-1640并將細(xì)胞轉(zhuǎn)入缺氧環(huán)境(94% N2+1% O2+5%CO2)進(jìn)行缺氧處理，缺氧結(jié)束后，將培養(yǎng)基換為完全培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)入常氧中進(jìn)行復(fù)氧；脂肪乳組(F)：缺氧前將培養(yǎng)基換為含脂肪乳的RPMI-1640進(jìn)行處理，余步驟與H/R組相同；丙泊酚預(yù)處理組(P)；缺氧前將培養(yǎng)基換為含丙泊酚的RPMI-1640進(jìn)行處理，余步驟與H/R組

3、相同；實(shí)驗(yàn)中采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞活力；Hoechst33258及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡；Western blotting檢測TLR4信號通路中蛋白表達(dá)及定量RT-PCR檢測TLR4 mRNA表達(dá)；比色法檢測細(xì)胞中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性變化。
　　結(jié)果：通過測定多個丙泊酚濃度，缺氧及復(fù)氧時間條件下的細(xì)胞活力，我們發(fā)現(xiàn)缺氧1.5 h/復(fù)氧2h時，丙泊酚(50μmol/l)可以通過明顯增強(qiáng)細(xì)