多療程糖皮質(zhì)激素治療早產(chǎn)的臨床評價及對胎盤11β-HSD2調(diào)控作用研究.pdf

1、背景：早產(chǎn)是嚴(yán)重影響圍生兒發(fā)病率和死亡率的重要原因，對于早產(chǎn)及時有效的治療可以改善圍生兒結(jié)局，提高出生人口素質(zhì)。早產(chǎn)治療中積極促胎肺成熟是基本原則，因此臨床上常采用產(chǎn)前糖皮質(zhì)激素治療。其中單療程糖皮質(zhì)激素治療效果肯定，副作用小，已被臨床接受。但對于治療1周后未分娩的早產(chǎn)孕婦，是否給予重復(fù)療程糖皮質(zhì)激素治療，目前尚未達(dá)成共識。動物試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)重復(fù)給予糖皮質(zhì)激素能引起胎仔生長受限、神經(jīng)發(fā)育遲緩等副作用，而對人的臨床觀察并不支持此觀點。因此，

2、對于產(chǎn)前重復(fù)糖皮質(zhì)激素治療的正確評價有著重要的臨床意義。近年來，通過對胎兒印跡效應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，胎盤中存在糖皮質(zhì)激素代謝的重要調(diào)節(jié)酶：11β-羥基類固醇脫氫酶(11β-hydroxysteroiddehydrogenase，11β-HSD)，其中11β-HSD2可以滅活有活性的糖皮質(zhì)激素，從而起到保護胎兒的屏障作用。但是，臨床重復(fù)糖皮質(zhì)激素治療后對于胎盤部位11β-HSD2表達(dá)有無影響，11β-HSD2是否起到積極的保護作用，尚未見報道。

3、 目的： 1、評價臨床產(chǎn)前不同療程糖皮質(zhì)激素治療早產(chǎn)后對母兒結(jié)局的近、遠(yuǎn)期影響； 2、觀察臨床產(chǎn)前不同療程糖皮質(zhì)激素治療后早產(chǎn)胎盤絨毛11β-HSD2和糖皮質(zhì)激素受體(GR)的表達(dá)； 3、探討地塞米松對離體早產(chǎn)胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2和GR表達(dá)的影響。 方法： 1、分析近六年在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院分娩的早產(chǎn)病例，根據(jù)產(chǎn)前是否接受糖皮質(zhì)激素(GC)治療及療程，分為：未用組、不足1療程

4、組、1療程組、2 療程組和3療程及以上組；記錄早產(chǎn)兒出生體重、身長、Apgar評分及近期并發(fā)癥，并隨訪1～7年體格發(fā)育、神經(jīng)和智力發(fā)育及運動功能等，通過多因素Logistic回歸分析評價重復(fù)療程糖皮質(zhì)激素治療對早產(chǎn)兒結(jié)局的影響。 2、收集臨床分娩的早產(chǎn)胎盤，根據(jù)產(chǎn)前接受糖皮質(zhì)激素治療與否及療程同前分組。通過SYBR Green I熒光染料定量PCR方法檢測各組胎盤絨毛11β-HSD2和GRmRNA表達(dá)，并用免疫組化方法檢測胎盤絨

5、毛11β-HSD2和GR蛋白。 3、收集早產(chǎn)分娩胎盤，通過酶消化法和組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，對于獲得的滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行純化、鑒定；用地塞米松(100nM)體外模擬兩療程GC給藥干預(yù)原代培養(yǎng)的絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞，通過SYBR Green I熒光染料定量PCR方法檢測用藥后1～7d每天滋養(yǎng)細(xì)胞11B-HSD2和GR mRNA表達(dá)情況，并用Western blot免疫印跡法檢測胎盤絨毛11β-HSD2和GR蛋白表達(dá)；此外在地塞米松

6、干預(yù)的同時加入RU486(1μM)共同作用檢測每天滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2和GR的蛋白和mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、四川大學(xué)華西第二醫(yī)院近6年間住院病人早產(chǎn)發(fā)生率4.6％；胎膜早破是導(dǎo)致早產(chǎn)的最主要原因，占36.0％；新生兒出生體重和身長Z積分，GC治療組與對照組間無顯著性差異(P>0.05)，不同療程GC治療組間比較無顯著性差異(P>0.05)；產(chǎn)前2療程GC治療后早產(chǎn)兒1minApgar≤7分發(fā)生風(fēng)險降低(OR,

7、0.57；95％CI,0.35～0.92)，3療程治療后亦降低(OR,0.10；95％CI,0.01-0.74)；產(chǎn)前2療程GC治療后早產(chǎn)兒5minApgar≤7分發(fā)生風(fēng)險降低(OR,0.13；95％CI,0.03-0.43)；2療程GC治療后嬰幼兒死亡風(fēng)險下降(OR,0.18；95％cLo.04-0.87)；GC治療組母兒感染發(fā)病率與對照組無明顯差異。 2、免疫組織化學(xué)染色法可見胎盤絨毛部位有11β-HSD2和GR蛋白表達(dá)；S

8、YBRGreen I熒光染料定量PCR法檢測未使用糖皮質(zhì)激素組(對照組)胎盤11β-HSD2mRNA表達(dá)低于使用糖皮質(zhì)激素組(P<0.05)，各療程激素治療組表達(dá)均高于對照組(P<0.05)，各療程激素治療組間比較無差異(P>0.05)；胎盤GR mRNA表達(dá)在各療程激素治療組與對照組及各激素治療組間表達(dá)比較無差異(P>0.05)；免疫組化檢測結(jié)果與熒光定量PCR法結(jié)果一致。 3、通過酶消化法結(jié)合組織塊培養(yǎng)法，可以獲取高純度的早

9、產(chǎn)階段晚孕胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞；SYBR Green I熒光染色定量PCR法可在體外培養(yǎng)滋養(yǎng)細(xì)胞檢測到11β-HSD2和GR mRNA表達(dá)；Western blot可在體外培養(yǎng)滋養(yǎng)細(xì)胞檢測到11β-HSD2和GR蛋白表達(dá)；DEX干預(yù)原代培養(yǎng)滋養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)1d后11β-HSD2 mRNA表達(dá)開始上升，第2d和第3d繼續(xù)升高(P<0.05)，第4d改為無藥物培養(yǎng)液后表達(dá)明顯下降，第5d～7d重復(fù)給藥后再次升高(P<0．05)；在地塞米松干預(yù)的同時加

10、入RU486(1μM)共同作用，可見每天滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2和GR的蛋白和mRNA表達(dá)有所下降(P>0．05)；Western blot檢測結(jié)果與熒光定量PCR法一致。 結(jié)論： 1、臨床資料顯示重復(fù)療程GC治療可以降低早產(chǎn)兒低Apgar評分發(fā)生，具有促胎肺成熟作用；同時并未降低出生胎兒體重和身長，未影響嬰幼兒生長發(fā)育和增加母兒感染發(fā)生。因此重復(fù)產(chǎn)前糖皮質(zhì)激素治療利大于弊，可在臨床中繼續(xù)使用； 2、產(chǎn)前給予早產(chǎn)

11、孕婦糖皮質(zhì)激素治療可以刺激胎盤11 β-HSD2表達(dá)，但對GR表達(dá)無明顯改變，此效應(yīng)不隨療程增加而變化，表明胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞在DEX刺激下具有調(diào)節(jié)11 β-HSD2能力，并且此能力不因臨床GC療程增加而減弱，因此參與對胎兒的屏障保護作用； 3、酶消化法結(jié)合組織塊培養(yǎng)法，可以從輕度早產(chǎn)胎盤上獲取高純度的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞；重復(fù)給予DEX具有刺激原代培養(yǎng)的胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞增加11 β-HSD2蛋白和mRNA表達(dá)的作用；聯(lián)合RU486用藥后可以