STAT4、T-bet和IL-2基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群哮喘的相關(guān)性研究.pdf

1、[研究背景]: 哮喘是由多種炎癥細(xì)胞(嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞)參與、由IgE介導(dǎo)的慢性炎癥性疾病，是一種由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的多基因遺傳病，主要表現(xiàn)為氣道高反應(yīng)性、氣道阻塞、氣道炎癥和氣道重構(gòu)。臨床以反復(fù)發(fā)作的咳嗽、喘鳴和呼吸困難為主要表現(xiàn)，可自愈或經(jīng)藥物緩解。 近年來陸續(xù)報(bào)道哮喘發(fā)生與Th1、Th2細(xì)胞分化不平衡有關(guān)。STAT4(signaltransducerandactivatoroftrans

2、cription4)---T-bet(T-boxexpressedinTcells)途徑與STAT6---GATA3途徑分別被認(rèn)為是Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞分化的兩種主要途徑。任何一條途徑出現(xiàn)異常都會(huì)導(dǎo)致，Th1/Th2細(xì)胞分化異常。已知Th2細(xì)胞的分化與哮喘發(fā)生密切相關(guān)，Th1方向分化減弱或者Th2方向分化增強(qiáng)都將導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)失常，引起哮喘。2005年，Park等在韓國(guó)人群中發(fā)現(xiàn)STAT4基因的單核苷酸多態(tài)(single nucleot

3、ide polymorphism，SNP)與哮喘相關(guān)，并認(rèn)為STAT4是特異性IgE產(chǎn)生的遺傳學(xué)因素之一.T-bet是Th1分化的重要轉(zhuǎn)錄因子。Susetta等報(bào)道T-bet基因缺失的小鼠會(huì)發(fā)生哮喘。同時(shí)在2006年發(fā)現(xiàn)，T-bet基因多態(tài)位點(diǎn)與美國(guó)人群哮喘和氣道高反應(yīng)性相關(guān)。2005年在日本人群中也發(fā)現(xiàn)，T-bet基因多態(tài)位點(diǎn)與藥物誘發(fā)的哮喘相關(guān)。IL-2位于4q27，包含4個(gè)外顯子，2006年，Ulla Christensen等首次

4、報(bào)道IL-2可作為哮喘的候選基因，并在丹麥人群中發(fā)現(xiàn)IL-2基因的兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)與介導(dǎo)過敏性疾病相關(guān)。上述遺傳學(xué)研究提示STAT4、T-bet和IL-2基因在不同人群中與哮喘和氣道高反應(yīng)性有不同程度的相關(guān)性，但到目前為止，上述三個(gè)基因在中國(guó)漢族人群中與哮喘的相關(guān)性尚未見報(bào)道。 [研究目的]: 利用病例一對(duì)照方法探討STAT4、T-bet及IL-2基因的三個(gè)多態(tài)位點(diǎn)與中國(guó)漢族人群哮喘之間的相關(guān)性。這些多態(tài)位點(diǎn)分別是：STAT

5、4基因啟動(dòng)子區(qū)域SNP位點(diǎn)-608 A>G，T-bet基因-1993T>C，IL-2基因啟動(dòng)子區(qū)域-92 T>G。 [研究方法]: 1．哮喘組與對(duì)照組樣本收集：收集中國(guó)漢族哮喘患者及正常對(duì)照個(gè)體外周血樣，提取基因組DNA。收集的哮喘患者均符合支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)；正常對(duì)照個(gè)體均無哮喘及其他過敏性疾病癥狀與病史，排除肝、腎疾病。 2．基因分型，基因型及等位基因頻率統(tǒng)計(jì)：用PCR-RFLP方法對(duì)STAT4基因-608

6、 A>G位點(diǎn)分型；用Tetra-primer ARMS-PCR方法對(duì)T-bet基因-1993T>C位點(diǎn)和IL2基因-92 T>G位點(diǎn)分型。根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果確定個(gè)體基因型，計(jì)算各位點(diǎn)在哮喘組及對(duì)照組中的基因型頻率及等位基因頻率。 3．Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)：根據(jù)Hardy-Weinberg平衡定律計(jì)算各多態(tài)位點(diǎn)在哮喘組和對(duì)照組的預(yù)期基因型頻率，采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。 4．基因型與等位基因分布差

7、異檢測(cè)：采用卡方檢驗(yàn)比較各多態(tài)位點(diǎn)在哮喘組與對(duì)照組的基因型與等位基因頻率差異，檢驗(yàn)多態(tài)位點(diǎn)與哮喘的相關(guān)性。 [結(jié)果] 1．STAT4基因多態(tài)位點(diǎn)-608A>G，在哮喘組中，A/A、A/G、G/G基因型頻率分別是0.536、0.377和0.086，在對(duì)照組中分別是0.515、0.399和0.086；等位基因A和G的頻率在哮喘組分別是0.725和0.275，在對(duì)照組分別是0.715和0.285，經(jīng)x2檢驗(yàn)p=0.889。

8、 2．T-bet基因多態(tài)位點(diǎn)-1993。T>C，哮喘組中，T/T、T/C、C/C基因型頻率分別是0.630、0.315、0.055，在對(duì)照組中分別是0.632、0.324、0.044；等位基因T和C的頻率在哮喘組分別是0.788、0.212，在對(duì)照組分別是0.794、0.206，經(jīng)x2檢驗(yàn)P=0.837。 3．IL-2基因多態(tài)位點(diǎn)-92 T>G，哮喘組中，T/T、T/G、G/G基因型頻率分別是0.344、0.511、0.14