以Rho-ROCK信號通路為靶點探討麻杏芎葶合劑干預低氧性肺動脈高壓大鼠模型的機制研究.pdf

1、目的：通過建立低氧性肺動脈高壓（HPH）大鼠模型，探討HPH形成的病理機制，觀察具有宣肺逐瘀化痰法的麻杏芎葶合劑對HPH大鼠肺動脈壓增高和血管結構重建的干預作用。并通過觀察rock-1基因及蛋白在HPH大鼠肺組織中的表達水平，探討Rho/ROCK信號傳導通路對低氧性肺動脈高壓的調控作用及麻杏芎葶合劑對低氧性肺動脈高壓干預的分子機制。
　　方法：Sprague-Dawley大鼠50只，雌雄各半，隨機均分為正常組、HPH模型組和法舒地

2、爾對照組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。采用常壓間斷低氧法：(10±0.5)％O2，每天間斷低氧6-8小時，每周缺氧6天，持續(xù)3周，建立大鼠HPH模型。每日放入低氧艙前給藥：法舒地爾組腹腔注射10mg/(kg·d)鹽酸法舒地爾注射液；中藥中劑量組給予10g/kg·d麻杏芎葶合劑藥液灌胃；中藥高劑量組給予20g/kg·d麻杏芎葶合劑藥液灌胃；正常組、HPH模型組按每100g體重1ml的生理鹽水灌胃。在第21天測定各組大鼠平均肺動脈壓力（me

3、an pulmonary artery pressure，mPAP）、平均頸動脈壓力（mean cervical arterial pressure，mCAP）、右心肥厚指數（right ventricular hypertrophy index，RVHI）；觀察光鏡下肺小動脈的形態(tài)學改變，利用圖像分析計算血管壁厚度占外徑的百分比（WT%）、管壁面積占血管總面積的百分比（WA%）及管腔面積與管總面積的百分比（LA%）。測定肌型動脈、部分

4、肌型動脈和非肌型血管所占比例及肌型肺小動脈中膜細胞核密度，觀察肺血管結構重建情況。在證實HPH建模成功后，應用Real time PCR、Westen bolt等技術，以分子生物學方法測定各組大鼠肺組織中Rho激酶ROCK-1基因及蛋白的表達量，并測定各組大鼠肺組織中Rho激酶底物——MBS Thr-697位的磷酸化的表達情況。
　　結果：
　　（1）低氧21天后，HPH模型組大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%、LA%、

5、肌型動脈、部分肌型動脈和非肌型血管所占比例、肌型肺小動脈中膜細胞核密度分別為（30.27±1.47）mmHg、（41.41±3.71）%、（55.23±3.07）%、（83.12±5.90）%、（16.88±1.74）%、（57.26±0.26）%、（17.46±2.78）%、（25.28±3.07）%、（9.41±1.90），與正常組（16.14±0.38）mmHg、（24.65±1.85）%、（33.41±3.65）%、（54.23

6、±4.61）%、（45.76±3.23）%、（7.88±0.83）%、（25.76±2.05）%、（66.36±3.65）%、（7.05±1.37）比較均有差異（P均＜0.05）。
　　（2）低氧21天后大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%、LA%、肌型動脈、部分肌型動脈和非肌型血管所占比例、肌型肺小動脈中膜細胞核密度，法舒地爾組大鼠分別為（18.85±0.65）mmHg、（30.24±1.82）%、（38.15±2.96）%、

7、（68.49±4.16）%、（31.50±3.53）%、（12.49±0.65）%、（36.58±2.55）%、（50.94±2.96）%、（13.13±2.61）；中藥中劑量組大鼠分別為（21.61±0.38）mmHg、（28.19±1.67）%、（43.12±3.61）%、（65.49±4.15）%、（34.51±3.38）%、（20.71±0.21）%、（30.86±2.03）%、（48.43±3.61）%、（11.28±1.08

8、）；中藥高劑量組大鼠分別為（23.25±1.19）mmHg、（27.64±1.55）%、（44.53±3.76）%、（69.90±4.22）%、（30.10±3.37）%、（20.77±0.19）%、（29.08±2.57）%、（50.15±3.76）%、（7.26±1.68）；以上三組分別與HPH模型組（30.27±1.47）mmHg、（41.41±3.71）%、（55.23±3.07）%、（83.12±5.90）%、（16.88±1

9、.74）%、（57.26±0.26）%、（17.46±2.78）%、（25.28±3.07）%、（9.41±1.90）比較均有差異性（P均＜0.05）。
　　（3）各組間mCAP比較未見顯著性差異（P均＞0.05）。
　?。?）HPH模型組大鼠肺小血管管壁明顯增厚；出現明顯肺小動脈重構特征：內皮細胞連續(xù)性破壞，血管內皮呈立方形或柱狀突向血管腔，甚至壞死脫落，中膜平滑肌細胞肥大、增生，管腔變小。與 HPH模型組比較，法舒地爾干

10、預組、中藥中、高劑量組大鼠肺小血管管壁較薄，管腔變寬，血管平滑肌細胞的肥大、增生程度以及內膜的增厚明顯減輕
　　經低氧干預三周（21天）后，HPH模型組大鼠 Rho激酶ROCK-1mRNA（2.680±0.061）與正常組大鼠（1.094±0.051）比較增高，差別有統計學意義(P＜0.05)。法舒地爾組、中藥中、高劑量組大鼠Rho激酶ROCK-1mRNA（1.661±0.0.90）、（2.035±0.078）、（1.962±0.

11、066）較正常組（1.094±0.051）均增高，差別有統計學意義(P＜0.05)，較HPH模型組大鼠（2.680±0.061）均降低，差別亦有統計學意義(P均＜0.05)。
　?。?）應用Western印跡法檢測，HPH模型組ROCK-1蛋白表達較正常組增加（P＜0.05），經法舒地爾、麻杏芎葶合劑干預過的法舒地爾組、中藥中、高劑量組ROCK-1蛋白表達較正常組升高（P＜0.05），較HPH模型組有不同程度降低（P＜0.05）。

12、
　?。?）免疫印跡結果顯示，HPH模型組P-MYPT1蛋白表達較正常組增加（P＜0.05），經法舒地爾、麻杏芎葶合劑干預過的法舒地爾組、中藥中、高劑量組P-MYPT1蛋白表達較正常組升高（P＜0.05），而較HPH模型組有所降低（P＜0.05）。
　　結論：
　　（1）麻杏芎葶合劑可以減輕低氧引起的肺動脈壓力的增加，改善右心室肥厚，肺血管結構重建，對低氧性肺動脈高壓有明確防治、干預作用。
　?。?）Rho/RO