MAPKs通路在低氧性肺動脈高壓中的作用及三七總皂苷干預.pdf

1、目的 1、研究MAPKs信號通路在大鼠低氧性肺動脈高壓(HPH)發(fā)生發(fā)展中的作用； 2、探討三七總皂苷防治HPH的作用及與MAPKs信號通路的關系。 方法： 1、慢性低氧性肺動脈高壓大鼠模型復制：雄性SD大鼠30只(體重200～220g)，隨機分成3組(n=12)，即正常對照組(N組)，低氧性肺動脈高壓組4周組(H組)和低氧性肺動脈高壓加三七總皂苷治療組(HP組)。將后兩組大鼠放入常壓低氧艙內(nèi)，使吸入氣氧

2、濃度維持在9％～11％，二氧化碳濃度低于3％(艙內(nèi)水蒸汽用無水CaCl2吸收，多余二氧化碳用氫氧化鈉吸收)，每天8小時，每周6天。HP組于每同進艙前半小時腹腔注射三七總皂苷注射液(50mg-kg-1·d-1)，其余兩組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。N組置于艙外，自由呼吸空氣。動物飼養(yǎng)到規(guī)定時間后，麻醉動物，右心導管法測量各組平均肺動脈壓(mPAP)，頸總動脈插管測量平均頸動脈壓(mCAP)，分別稱量右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV

3、+S)重量；HE染色測量肺細小動脈管壁面積/管總面積[(WA/TA)％]。以mPAP、mCAP、RV/(LV+S)％、(WA/TA)％作為判斷模型建立成功的指標。 2、western印跡法、免疫組織化學技術、激光共聚焦顯微鏡下采用免疫熒光法檢測肺組織及肺血管p-P38、p-ERK、P38、ERK蛋白的表達。 3、取大鼠右肺及左下肺裝入DEPC水處理的冷凍管-70℃保存，用于RT-PCR檢測肺組織p38MAPK、ERK1

4、mRNA的變化。 結果： 1、H組大鼠mPAP、RV/(LV+S)％及(WA/TA)％分別為(23.26±1.38)mm Hg、(35.99±0.71)％和(58.37±1.28)％，與N組[(11.23±0.71)mm Hg、(23.31±0.89)％和(27.84±1.17)％]比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，說明低氧性肺動脈高壓大鼠模型復制成功。各組間mCAP無顯著差異(P>0.05)。 2、免疫

5、組化檢測肺小動脈壁石蠟切片顯示：H組肺小動脈壁p-P38蛋白、p-ERK蛋白明顯表達。 3、Western blot檢測肺組織p-P38蛋白顯示在N組表達不明顯，在H組表達上升為0.219±0.253，與N組(0.077±0.949)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；肺組織p-ERK蛋白在N組表達不明顯，在H組表達上升為0.374±0.066，與N(0.012±0.068)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 4、

6、RT-PCR檢測肺組織p38MAPK mRNA顯示：在N組表達不明顯，在H組表達上升為0.356±0.358，與N組(0.12±0.123)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；肺組織ERK1 mRNA顯示：N組表達不明顯，在H組表達上升為0.43±0.036，與N組(0.16±0.026)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 5、HP組肺組織p-P38、p-ERK蛋白，肺小動脈壁p-P38、p-ERK蛋白表達較H組均降低(P