PI3K抑制劑wortmannin對卵巢癌細胞Survivin和Caspase-3蛋白活性的影響.pdf

1、目的：
　　 卵巢癌是女性生殖器常見的三大惡性腫瘤之一，因缺乏有效的早期診斷方法，診斷時多為晚期，大量國內(nèi)外臨床資料顯示，卵巢癌患者的五年生存率僅為25％～30％，隨著近代宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌診治進展，卵巢癌已成為嚴重威脅婦女生命和健康的主要腫瘤，究其原因，是70％以上的卵巢癌診斷時，病變范圍已超出卵巢，發(fā)生轉(zhuǎn)移。卵巢惡性腫瘤的治療原則是手術為主，輔以化療、放療及其他綜合治療，其中化療為主要的輔助治療手段。因卵巢惡性腫瘤對化療較敏

2、感，即使已廣泛轉(zhuǎn)移也能取得一定療效，既可用于復發(fā)，也可用于術后有殘留癌灶患者，可緩解癥狀延長存活期。
　　 但是近年來隨著卵巢癌化療耐藥問題的不斷出現(xiàn)，嚴重影響了卵巢癌的治療效果。大量對卵巢癌細胞系和動物模型的研究已經(jīng)證明，PI3K/AKT信號通路異?；罨c卵巢癌化療耐藥有關，抑制該通路可以明顯增加化療藥物的抗腫瘤效應，而且副作用亦有所減小。臨床和實驗研究證明wortmannin是PI3K的特異性抑制劑，它能間接抑制痛細胞的訊息

3、傳遞，使得癌細胞無法生長而讓腫瘤變小或消失。本實驗擬觀察wormannin對卵巢癌細胞增殖和凋亡的影響，分析其抑制腫瘤生長的機制。
　　 本實驗通過檢測經(jīng)PI3K抑制劑wortmannin作用后卵巢癌細胞系CAOV3中凋亡調(diào)控因子（survivin蛋白）和半胱氨酸門冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3蛋白）的表達及變化情況，初步探究PI3K/AKT信號傳導通路影響卵巢癌細胞增殖及凋亡的機制，為卵巢癌的治療提供新的實驗依據(jù)。

4、>　　 方法：
　　 1、實驗方法
　　 應用western blot方法檢測經(jīng)不同濃度wortmannin(0、100、300、500nmol/L)作用以及作用不同時間(0、6、12、36h)后，卵巢癌細胞系CAOV3中survivin蛋白及caspase-3蛋白的表達及變化趨勢，同時檢測二者之間的相關性。
　　 2、統(tǒng)計學方法
　　 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行獨立樣本t檢驗及相關分析，

5、P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義；實驗數(shù)據(jù)取三次獨立實驗數(shù)據(jù)的平均值。
　　 結(jié)果：
　　 1、藥物濃度梯度實驗：卵巢癌細胞系CAOV3經(jīng)不同濃度wortmannin作用后，caspase-3蛋白隨著wortmannin作用濃度增加呈遞增式表達，而survivin蛋白隨著wortmannin作用濃度增加表達則逐漸減弱，100nmol/L wortmannin組survivin蛋白的表達強度約為0nmol/L組的1/2，兩

6、組之間的統(tǒng)計學差異較survivin蛋白其他相鄰組間差異更為明顯（P＜0.01）。
　　 2、藥物時間梯度實驗：卵巢癌細胞系CAOV3經(jīng)300nmol/L wortmannin作用不同時間后，caspase-3蛋白隨著wortmannin作用時間延長呈遞增式表達，作用累及12h時，caspase-3蛋白的表達強度約為0h的2.5倍；Survivin蛋白則隨著wortmannin作用時間延長表達逐漸減弱。
　　 3、cas

7、pase-3與survivin蛋白在卵巢癌細胞系CAOV3中的表達具有對應性，隨著wortmannin作用濃度增加、作用時間延長，caspase-3蛋白表達上調(diào)，survivin蛋白表達下調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 在卵巢癌細胞系CAOV3中，wortmannin增強凋亡蛋白caspase-3表達，且與作用濃度及作用時間呈正相關；wortmannin抑制存活蛋白survivin表達，且與作用濃度及作用時間呈負相關；應用wo