PI3K抑制劑LY294002對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的ER-a表達(dá)及其磷酸化的影響.pdf

1、目的:使用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞,觀察PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑LY294002對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中雌激素受體ER-a的表達(dá)以及ER-a AF-1區(qū)磷酸化的影響。探討PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與ER信號(hào)通路之間的關(guān)系,初步闡述 ER-a(+)乳腺癌患者出現(xiàn)激素治療抵抗的分子生物學(xué)機(jī)制,為臨床上ER(+)乳腺癌患者激素耐藥提供一種合理的治療方案。
　　方法:將MCF-7細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)液(含

2、10％小牛血清)中采用單層貼壁傳代培養(yǎng),培養(yǎng)細(xì)胞 MCF-7用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后,在無酚紅 DMEM(含5%胎牛血清)中繼續(xù)培養(yǎng)4天。根據(jù)藥物作用劑量分組:第一組(實(shí)驗(yàn)空白對(duì)照組),不加入任何藥物。第二組(低劑量LY294002實(shí)驗(yàn)組),細(xì)胞培養(yǎng)液中藥物濃度為5μmol/L。第三組(中劑量LY294002實(shí)驗(yàn)組),細(xì)胞培養(yǎng)液中藥物濃度為10μmol/L。第四組(高劑量 LY294002實(shí)驗(yàn)組),細(xì)胞培養(yǎng)液中藥物濃度為20μmo

3、l/L。根據(jù)藥物作用時(shí)間分別在0小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)收集各組細(xì)胞,使用蛋白免疫印跡Western blotting方法檢測(cè)ER-a及磷酸化ER-a的表達(dá)情況,觀察藥物作用劑量和作用時(shí)間對(duì)ER-a和ER-a的AF-1區(qū)磷酸化的影響。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,采用SNK-q檢驗(yàn)法檢驗(yàn)各蛋白表達(dá)的差異。
　　結(jié)果:1.人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞ER-a的表達(dá)情況:經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)分析表明,各劑量組MCF-7細(xì)

4、胞ER-a在藥物作用不同時(shí)間后表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。各時(shí)間組MCF-7細(xì)胞ER-a在不同劑量藥物作用下的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。
　　2.人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞ER-a的AF-1區(qū)的磷酸化情況:同一藥物劑量在藥物作用不同時(shí)間后MCF-7細(xì)胞ER-a的AF-1區(qū)的磷酸化經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)分析表明,低劑量實(shí)驗(yàn)組MCF-7細(xì)胞ER-a的AF-1區(qū)在藥物作用不同時(shí)間后其磷酸化水平無顯著性差異(P>0.05),中劑

5、量實(shí)驗(yàn)組和高劑量實(shí)驗(yàn)組MCF-7細(xì)胞ER-a AF-1區(qū)在藥物作用不同時(shí)間后其磷酸化有顯著性差異(P<0.05),隨著給藥時(shí)間延長,ER-a AF-1區(qū)磷酸化水平下降,在藥物作用48小時(shí)后ER-a AF-1區(qū)磷酸化水平繼續(xù)下降不明顯。在藥物作用同一時(shí)間段各不同劑量組MCF-7細(xì)胞ER-a的AF-1區(qū)的磷酸化經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)分析表明,在給藥后不同的時(shí)間點(diǎn),空白劑量組和低劑量組ER-a的AF-1區(qū)磷酸化無顯著性差異(P>0.05),中劑量組

6、和高劑量組與空白對(duì)照組ER-a的AF-1區(qū)磷酸化有顯著性差異(P<0.05),且隨著藥物劑量的增加,ER-a的AF-1區(qū)磷酸化水平下降越明顯。
　　結(jié)論:1.PI3K抑制劑LY294002對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞ER-a的表達(dá)無明顯影響。
　　2.PI3K抑制劑LY294002可以抑制人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞ER-a的AF-1區(qū)磷酸化。
　　3.PI3K抑制劑LY294002對(duì)MCF-7細(xì)胞ER-a的AF-1