1α，25（OH）-,2-D-,3-與臍血單個(gè)核細(xì)胞Th2分化相關(guān)性的研究.pdf

1、1α，25(OH)2D3是維生素D的活性形式，以往對(duì)其在鈣磷平衡及骨代謝中作用的研究較多，目前發(fā)現(xiàn)它對(duì)體內(nèi)的免疫系統(tǒng)也具有重要的調(diào)節(jié)作用。人類的免疫相關(guān)性疾病主要包括以Th1優(yōu)勢(shì)為主的自身免疫疾病和Th2亢進(jìn)的變態(tài)反應(yīng)性疾病，對(duì)1Q，25(0H)2D3在自身免疫性疾病中的作用人們已取得一定的共識(shí)，而對(duì)其在變態(tài)反應(yīng)性疾病中的效應(yīng)研究較少。本課題通過(guò)檢測(cè)臍血250HD3濃度和1α，25(OH)2D3在體外不同條件下對(duì)臍血單個(gè)核細(xì)胞胞生成細(xì)胞

2、因子的影響，探討新生兒出生時(shí)的維生素D狀態(tài)和1α，25(OH)2D3對(duì)臍血Th細(xì)胞分化的作用以及在變態(tài)反應(yīng)性疾病中所起的作用。 第一部分臍血250HD3與單個(gè)核細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子的水平 目的：了解新生兒的維生素D水平，推測(cè)產(chǎn)婦的維生素D儲(chǔ)備狀態(tài)；同時(shí)評(píng)估新生兒早期的Th細(xì)胞極化狀態(tài)。 方法：選取2004年9～10月間在本院分娩的32例新生兒臍血，用放免法檢測(cè)血漿250HD3水平。同期，另選9例正常分娩新生兒的臍血，

3、抗凝分離單個(gè)核細(xì)胞(CBMC)，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的IFNY和IL-4比例。 結(jié)果：250HD3檢測(cè)值為53．0±24．8nmol／L，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布(p=0．575)。其中正常組(≥40nmol／L)20例，異常組(＜40nmol／L)12例，2例為嚴(yán)重低下(≤25nmol／L)。 CBMC內(nèi)CD4+細(xì)胞的IFNγ和IL-4檢測(cè)結(jié)果顯示，CD4+IFNγ+細(xì)胞的比例范圍是O．41～6．45％，CD4+I

4、L-4+細(xì)胞的比例范圍是0．08～1．59％。兩組數(shù)值呈正態(tài)分布(p值為0．786和0．908)，兩者無(wú)明顯相關(guān)性(r=0．089，p＞0．05)。 結(jié)論：依據(jù)普通成人的標(biāo)準(zhǔn)，從臍血的250HD3水平推測(cè)，目前妊娠期維生素D不足的現(xiàn)象仍較為普遍，而維生素D水平低下對(duì)妊娠婦女和新生兒都會(huì)造成不利影響。由此提示本地對(duì)防治維生素D缺乏和相應(yīng)的監(jiān)測(cè)工作存在不足。臍血Th細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果，提示新生兒出生時(shí)的Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞分化狀態(tài)表現(xiàn)

5、為Th1優(yōu)勢(shì)的特征，個(gè)體間差異較大，Thl和Th2細(xì)胞比例間無(wú)明顯相關(guān)性。 第二部分1α，25(OH)2D3對(duì)臍血Th1／Th2分化的影響 目的：研究1α，25(OH)2D3在不同條件下，影響臍血Th細(xì)胞分化的趨勢(shì)。 方法：將分離獲得的9例臍血單個(gè)核細(xì)胞(CBMC)加入PHA后分為四組，置于四種不同的環(huán)境中培養(yǎng)，包括1α，25(OH)2D3，1α，25(OH)2D3+IL-4和IL-4以及空白培養(yǎng)液。應(yīng)用流式細(xì)胞

6、術(shù)，在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)1天、3天和7天時(shí)，檢測(cè)CD4+IFN-γ+細(xì)胞和CD4+IL-4+比例。比較相同時(shí)間不同條件下，1α，25(OH)2D3干預(yù)的組間差異和1α，25(OH)2D3干預(yù)對(duì)細(xì)胞分化的影響隨時(shí)間的變化趨勢(shì)。 結(jié)果：各時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組CD4+IFNγ+細(xì)胞和CD4+IL-4+細(xì)胞比例均逐漸增多。單純1α，25(OH)2D3干預(yù)時(shí)，與對(duì)照組相比CD4+IFNγ+細(xì)胞的生成受到抑制，此效應(yīng)至第3天時(shí)更明顯，

7、均值分別為1．12％和6．0％(t=4．998，p＜0．001)，而對(duì)CD4+IL-4+細(xì)胞比例則起促進(jìn)作用，均值分別為1．73％和0．92％(t=5．822，p＜0．001)，但這一促進(jìn)并未呈持續(xù)表現(xiàn)，而是逐漸減弱，至第7天已出現(xiàn)抑制樣的特征(均值分別為0．46％和1．15％，t=5．941，O＜0．001)。同時(shí)加入IL-4和1α，25(0H)2D3組，與單加IL-4的對(duì)照組相比，IFNγ+細(xì)胞的生成也受到抑制，但抑制作用呈減弱趨勢(shì)

8、，第7天時(shí)呈現(xiàn)促進(jìn)樣變化，無(wú)組間差異(43％和2．5％，t=1．854，p＞0．05)；對(duì)生成CD4+IL-4+細(xì)胞作用，第1天與對(duì)照組相比已呈抑制(1．04％和1．24％，t=2．877，p<0．05)，并且隨作用時(shí)間延續(xù)，其抑制作用逐步增強(qiáng)。1α，25(OH)2D3組的3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的各檢測(cè)結(jié)果顯示組間方差齊性(p＞0．05)，CD4+IFNγ+細(xì)胞和CD4+IL-4+細(xì)胞的各自差異有顯著意義(F=8．382和7．932，p＜0．01)

9、。組內(nèi)比較，顯示CD4+IFNγ+細(xì)胞的差異隨時(shí)間變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0．01)；CD4+IL-4’的改變第3天起有顯著差異(p＜0．01)。1Qα，25(OH)2D3+IL-4組的結(jié)果方差亦呈齊性(p＞0．05)，CD4+IFNY’細(xì)胞和CD4+IL-4+細(xì)胞的各自差異顯著(F=5．178和7．162，p=0．014和0．004)。組內(nèi)比較，CD4+IFNγ+細(xì)胞和CD4+IL-4+細(xì)胞的變化均從第3天有顯著差異(p＜0．01)。