體外聯合誘導臍血單個核細胞向內皮樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的： 探討細胞外基質、植物血球凝集素(phytohemagglutinin，PHA-M)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)，聯合誘導人臍血單個核細胞(mononuclear cells，MNC)向內皮樣細胞分化的可行性，及此體系中不同細胞外基質(extracellula

2、r matrix，ECM)對內皮樣細胞誘導效率的影響。 方法： 密度梯度離心法分離臍血單個核細胞，在含有PHA、VEGF、bFGF及ECM等具有誘導分化作用的因子的培養(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及三維體系中血管的形成；應用免疫細胞化學，半定量RT-PCR、流式細胞學等方法檢測內皮細胞標記Ⅷ因子、假性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)和-氧化氮合酶(endothelial ni

3、tric oxide synthase，eNOS)及CD31的表達，并描繪細胞生長曲線，以鑒定誘導的細胞生物學特性及比較不同細胞外基質對誘導效率的影響。 結果： ①倒置顯微鏡下觀察結果：最初貼壁時細胞為小圓形，PHA刺激24小時后細胞聚集成團，誘導第5天集落周邊出現少量梭形細胞且數量逐漸增多；7天可見線狀排列，大量典型梭形貼壁細胞生成，在三維培養(yǎng)體系中形成血管樣結構。 ②培養(yǎng)7天，貼壁細胞表達內皮細胞標記FⅧ因子

4、，eNOS、vWF和CD31。 ③FN組培養(yǎng)7天后eNOS(0.476±0.072)、vWF(0.729±0.114)表達均高于其它兩組(P<0.05)；其CD31的表達率由第7天(48.04±5.34％)到第14天(72.90±8.54％)，均高于同一時間膠原組與對照組(P<0.05)。 結論： ①臍血中存在內皮前體細胞，分離得到的單個核細胞能在體外定向誘導分化為內皮樣細胞。 ②證實在不降低誘導效率的前