內(nèi)皮細(xì)胞損傷及增殖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常是心血管疾病的初始事件。從細(xì)胞、分子水平研究在病理生理狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，對(duì)我們深入了解各種疾病的發(fā)生和發(fā)展有很大意義，也有助于我們研究藥物的作用機(jī)制。本文的目的是研究在內(nèi)皮細(xì)胞損傷和異常增殖過程中涉及到的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，并對(duì)藥物的作用機(jī)理從細(xì)胞、分子水平加以闡釋。本文的主要工作如下： 建立內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷模型，發(fā)現(xiàn)用過氧化氫刺激內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)使將近50％左右細(xì)胞死亡，而阿魏酸的加入可以起到保護(hù)細(xì)胞的作

2、用，極大程度的恢復(fù)細(xì)胞活力，使其恢復(fù)到正常水平的90％左右。Griess試劑法檢測(cè)NO含量的變化，發(fā)現(xiàn)損傷狀態(tài)下伴有NO的大量釋放，而阿魏酸可以減少NO的產(chǎn)生。應(yīng)用蛋白免疫印跡方法，檢測(cè)到阿魏酸可以抑制由過氧化氫引起的MAPK家族(ERK、p38、JNK)的激活，促進(jìn)eNOS的表達(dá)，降低iNOS和ICAM-1的表達(dá)，起到了保護(hù)作用。 建立內(nèi)皮細(xì)胞的增殖模型，發(fā)現(xiàn)脂多糖促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成和活細(xì)胞數(shù)增加，并促使內(nèi)皮細(xì)胞從G0/

3、G1期進(jìn)入S期，從而誘發(fā)增殖；激活ERK途徑和p38途徑，不激活JNK途徑；對(duì)eNOS的表達(dá)無顯著性影響，促進(jìn)iNOS和ICAM-1的表達(dá)。 在此基礎(chǔ)上再應(yīng)用ERK抑制劑PD98059、p38抑制劑SB202190、NO供體SNP、NOS抑制劑L-NAME及PI3K抑制劑LY294002，以考察各信號(hào)之間的關(guān)聯(lián)。發(fā)現(xiàn)PD98059、L-NAME及LY294002抑制LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，使細(xì)胞滯留在G0/G1期。而SB20219

4、0、SNP促進(jìn)了細(xì)胞增殖，使細(xì)胞進(jìn)入S期。SB202190顯著增加了ERK的磷酸化，LY294002抑制了iNOS的表達(dá)，L-NAME降低的ICAM-1的表達(dá)。綜上，得出結(jié)論如下： 1.LPS激活ERK和p38，而后者的激活負(fù)調(diào)控ERK；ERK的激活促進(jìn)細(xì)胞增殖； 2.PI3K激活iNOS促進(jìn)NO產(chǎn)生；iNOS激活I(lǐng)CAM-1 3.以上兩條通路各自獨(dú)立的調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞增殖過程，彼此對(duì)另外一條途徑都不存在直接的影響。