非霍奇金淋巴瘤患者sVEGF、sbFGF水平變化及姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞株VEGF表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的： 研究非霍奇金淋巴瘤（non Hodgkin lymphoma，NHL）患者血清血管內(nèi)皮生長因子（serum vascular endothelial growth factor，sVEGF）及血清堿性成纖維細(xì)胞生長因子（serum basic fibroblast growth factor，sbFGF）水平與臨床特征的關(guān)系；探討抗血管生成藥物姜黃素對(duì)人非霍奇金淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖及VEGF表達(dá)的影響，為臨床抗血管新生

2、治療提供理論依據(jù)。 方法： ELISA法檢測不同病期NHL患者sVEGF、sbFGF水平，并收集臨床資料，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；ELISA法檢測姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞上清中VEGF含量變化的影響；不同濃度姜黃素（5umol/L、10umol/L、25umol/L、50umol/L）作用于Raji細(xì)胞24h、48h、72h后，WST-1法檢測姜黃素對(duì)細(xì)胞增殖的影響；倒置相差顯微鏡下觀察Raji細(xì)胞形態(tài)及生長情況：Annexin-V

3、/PI雙標(biāo)流式細(xì)胞術(shù)檢測Raji細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果： 1.NHL患者sVEGF水平 （1）NHL初治化療前36例，其sVEGF濃度為（443.59±203.48）pg/ml；正常對(duì)照組19例，其sVEGF濃度為（90.50±21.42）pg/ml，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 （2）化療后完全緩解（complete remission，CR）者17例，其sVEGF濃度為（96.34±38.84

4、）pg/ml；部分緩解（partial remission，PR）者11例，其sVEGF濃度為（109.54±46.37）pg/ml；復(fù)發(fā)進(jìn)展（palindromia，PD）者8例，其sVEGF濃度為（553.96±250.08）pg/ml，初治化療前sVEGF明顯高于CR者（P<0.01）、也高于PR者（P<0.05）；PD者sVEGF比初治化療前稍高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.526>0.05）。 （3）第一療程達(dá)CR者9

5、例，其化療前sVEGF濃度為（152.11±57.98）pg/ml；未達(dá)CR者27例，其化療前sVEGF濃度為（540.75±124.45）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （4）比較36例初治化療前sVEGF與多個(gè)臨床相關(guān)因素的關(guān)系，結(jié)果顯示Ⅲ～Ⅳ期患者sVEGF水平高于Ⅰ～Ⅱ期者（P<0.05）：高中危～高危組sVEGF水平高于低?！椭形＝M（P<0.05）：LDH升高者sVEGF水平明顯高于LDH正常者（P<

6、0.05）；β2-Mg升高者sVEGF水平明顯高于β2-Mg正常者（P<0.05）：而sVEGF水平與性別、年齡、全身癥狀及結(jié)外病變數(shù)目均無顯著相關(guān)性（P均>0.05）。 2.NHL患者sbFGF水平 （1）NHL初治化療前36例，其sbFGF濃度為（314.47±132.01）pg/ml；正常對(duì)照組19例，其sbFGF濃度為（78.55±36.35）pg/ml，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （2）化

7、療后CR者17例，其sbFGF濃度為（82.28±34.85）pg/ml：PR者11例，其sbFGF濃度為（126.21±61.02）pg/ml； PD者8例，其sbFGF濃度為（338.40±161.12）pg/ml。初治者sbFGF濃度明顯高于CR、PR者（P均<0.05）； PD者sbFGF濃度比初治化療前稍高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.246>0.05）。 （3）第一療程達(dá)CR者9例，其化療前sbFGF濃度為（151.

8、14±35.09）pg/ml；未能達(dá)CR者27例，其化療前sbFGF濃度為（346.39±121.40）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （4）比較36例初治患者sbFGF與多個(gè)臨床相關(guān)因素的關(guān)系，結(jié)果顯示Ⅲ～Ⅳ期患者sbFGF水平高于Ⅰ～Ⅱ期者（P<0.05）；高中?！呶＝MsbFGF水平高于低?！椭形＝M（P<0.05）； LDH升高者sbFGF水平明顯高于LDH正常者（P<0.05）；β2-Mg升高者sbFG

9、F水平明顯高于β2-Mg正常者（P<0.05）；而sbFGF水平與性別、年齡、全身癥狀及結(jié)外病變數(shù)目均無顯著相關(guān)性（P均>0.05）。 3.sVEGF與sbFGF的相關(guān)性 pearson相關(guān)分析表明sVEGF與sbFGF具有顯著正相關(guān)性（r＝0.548，P<0.05）。 4.姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞上清VEGF含量的影響 ELISA法檢測10、25umol/L姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞作用24h后上清液中VEG

10、F含量的變化，結(jié)果顯示，對(duì)照組上清液中VEGF濃度為（707.92±55.92）pg/ml；而10、25umol/L姜黃素處理組細(xì)胞上清液中VEGF濃度分別為（369.73±14.22）pg/ml、（178.24±21.18）pg/ml，與對(duì)照組相比兩者均顯著性降低（P均<0.05）。 5.姜黃素處理Raji細(xì)胞后WST-1法檢測結(jié)果 Sumol/L姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞無明顯抑制作用；10μmol/L、25μmol/L

11、、50μmol/L姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞增殖有顯著抑制作用，呈濃度和時(shí)間依賴性。 6.姜黃素處理Raji細(xì)胞后形態(tài)變化 倒置相差顯微鏡下可見Raji細(xì)胞由成團(tuán)生長變?yōu)閱蝹€(gè)散在，細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞體積變小，折光性減弱，有的細(xì)胞膜破裂，可見細(xì)胞碎片。 7.姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞凋亡的影響 流式細(xì)胞儀檢測濃度為10、25umol/L姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果示隨著姜黃素作用濃度及時(shí)間增加，細(xì)胞凋亡率隨之

12、增加。作用24h，Raji細(xì)胞凋亡率分別為11.12%、25.07%；作用48h，凋亡率分別為14.74%、33.50%；作用72h，凋亡率分別為25.11%、55.98%，均高于對(duì)照組1.75%、2.25%、2.77%的凋亡率（P均<0.01）。 結(jié)論： 1.NHL患者sVEGF、sbFGF水平顯著高于正常對(duì)照，并與臨床分期、IPI預(yù)后分組、LDH及β2-Mg有關(guān)。提示NHL的發(fā)病與血管新生有關(guān)，且可聯(lián)合其他指標(biāo)一起作