誘導(dǎo)EBV裂解復(fù)制進(jìn)行EBV陽(yáng)性腫瘤治療的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、鼻咽癌的發(fā)生與EBV裂解復(fù)制相關(guān),在血清中EBV拷貝數(shù)高于對(duì)照組,而在外周循環(huán)血細(xì)胞中EBV的拷貝數(shù)與鼻咽癌的關(guān)系如何?為解決上述科學(xué)問題,我們首次應(yīng)用熒光定量PCR方法,進(jìn)行鼻咽癌患者外周血細(xì)胞內(nèi)EBV拷貝數(shù)檢測(cè).首次發(fā)現(xiàn)并證實(shí)在鼻咽癌外周血細(xì)胞內(nèi)EBV拷貝數(shù)低于正常對(duì)照人群.這是否可認(rèn)為:EB病毒發(fā)生了裂解復(fù)制,破壞了宿主B細(xì)胞,導(dǎo)致攜帶病毒的B細(xì)胞減少,并使血漿中的流離EBV拷貝數(shù)增加;同時(shí)上皮細(xì)胞內(nèi)病毒的裂解復(fù)制也促進(jìn)了鼻咽癌的

2、發(fā)生.對(duì)這一假說,還需進(jìn)一步的工作加以證實(shí).總之,結(jié)合已有的研究成果,我們證實(shí)鼻咽癌存在EBV潛伏感染與裂解感染兩種狀態(tài).在鼻咽癌組與對(duì)照組中均發(fā)現(xiàn)兩例拷貝較高者,拷貝數(shù)達(dá)10<'5>拷貝/μg DNA以上,尤其在鼻咽癌組中兩例較其平均值高了一個(gè)數(shù)量級(jí).對(duì)此極高拷貝者是否說明其惡性程度較低?或有較好的預(yù)后?仍需我們進(jìn)行進(jìn)一步的分析.根據(jù)以上的研究進(jìn)展,我們首次將FR序列與BZLF1基因聯(lián)合應(yīng)用于EBV陽(yáng)性腫瘤的治療中.我們的實(shí)驗(yàn)從EBV

3、陽(yáng)性鼻咽癌腫瘤細(xì)胞系5-8F與EBV陰性鼻咽癌腫瘤細(xì)胞系HNE3著手.通過Western blot方法檢測(cè)EBV裂解復(fù)制相關(guān)蛋白Zta、EA-D與gp125的表達(dá),間接證實(shí)EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞導(dǎo)入FR-BZLF1質(zhì)?？烧T導(dǎo)EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的特異殺傷.應(yīng)用Gardella凝膠分析法FR-BZLF1質(zhì)?？梢l(fā)EBV裂解復(fù)制.進(jìn)而,我們應(yīng)用MTT及細(xì)胞集落形成率實(shí)驗(yàn)證實(shí)導(dǎo)入該治療質(zhì)粒具有明顯殺傷EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的作用.我們首次將NF-κB抑

4、制劑應(yīng)用于EBV陽(yáng)性腫瘤的治療中.EBV相關(guān)腫瘤可分為上皮細(xì)胞來源與B細(xì)胞來源.因此,我們選用EBV陽(yáng)性的B細(xì)胞來源的B95.8、Raji細(xì)胞及上皮來源的5-8F細(xì)胞、EBV陰性HNE3細(xì)胞為材料,分別應(yīng)用Bay 11-7082、Z-LLF-CHO及阿斯匹林抑制NF-κB活性,研究抑制NF-κB活性用于EBV陽(yáng)性腫瘤治療的可行性.我們通過多種策略誘導(dǎo)EBV裂解復(fù)制,達(dá)到了特異殺傷EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的目的.在加用GCV后,作用更為明顯,而