Klotho真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其干預(yù)自發(fā)性高血壓大鼠高血壓進(jìn)程與心臟損害的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：RT-PCR擴(kuò)增小鼠全長(zhǎng)Klotho(KL)cDNA，構(gòu)建pAAV.mKL重組質(zhì)粒，驗(yàn)證其在COS-7細(xì)胞中的表達(dá)情況；重組質(zhì)粒pAAV.mKL與pHelper和pAAV.RC三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293細(xì)胞，包裝rAAV.mKL；并利用rAAV.mKL轉(zhuǎn)染SHR大鼠，研究KL過(guò)表達(dá)對(duì)SHR大鼠血壓進(jìn)程及心肌肥大、心肌纖維化的影響，為KL在高血壓病及其心臟損傷中的基因治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：(1)從小鼠腎臟組織中提取總R

2、NA，通過(guò)RT-PCR獲得全長(zhǎng)KL cDNA，將其克隆到pAAV-HnGFP質(zhì)粒上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pAAV-mKL，將其轉(zhuǎn)染COS-7真核表達(dá)細(xì)胞，并通過(guò)觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)、RT-PCR和免疫熒光檢測(cè)KL在COS-7細(xì)胞中的表達(dá)；(2)應(yīng)用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入AAV-293細(xì)胞，包裝獲得rAAV.mKL；(3)應(yīng)用rAAV.KL轉(zhuǎn)染SHR大鼠，研究KL過(guò)表達(dá)對(duì)SHR大鼠血壓進(jìn)程及其心肌肥大、心肌纖維化的影響。
　　結(jié)

3、果：(1)通過(guò)RT-PCR獲得全長(zhǎng)小鼠KL cDNA片斷，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pAAV.mKL，驗(yàn)證了其使COS-7細(xì)胞KL表達(dá)增加；(2)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293細(xì)胞，包裝出rAAV.mKL，提取病毒DNA，PCR驗(yàn)證rAAV.mKL攜帶有小鼠KL cDNA片段；(3)KL表達(dá)上調(diào)可以阻止高血壓進(jìn)程，降低心臟體重指數(shù)，抑制心肌肥大和心肌纖維化。
　　結(jié)論：通過(guò)pAAV.mKL轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，可以上調(diào)其KL的表達(dá)。rAAV.mK