雙色實時熒光定量PCR及熒光原位雜交檢測唐氏綜合征.pdf

1、目的：建立唐氏綜合征基因診斷和產前診斷的雙色熒光定量PCR新技術，以實現快速、簡便、高通量檢測這一發(fā)病高、危害大的染色體異常綜合征；并應用熒光原位雜交技術檢測外周血淋巴細胞和羊水中胎兒細胞培養(yǎng)后的染色體鋪片，探索應用熒光原位雜交技術檢測唐氏綜合征的可能性；用兩者的結果相互印證和比較兩者各自的優(yōu)缺點?！　》椒ǎ禾崛?2例正常人和27例唐氏綜合征患者的外周血淋巴細胞和羊水中胎兒細胞DNA；設計合成含兩種熒光素的DSCR1和GAPD基因特異

2、的TaqMan探針，然后優(yōu)化PCR反應條件，在同一個反應管中同時進行DSCR1基因和看家基因GAPD的Q-PCR反應，并使得兩者的反應效率基本一致，每個樣本重復三次，比較正常人群和患者群體兩個基因的△CT的變異范圍，對兩組人的△CT做統計學分析，觀察兩者的△CT均值是否有統計學意義。用熒光間接標記的人的DSCR1基因的部分序列與染色體進行原位雜交和用熒光直接標記的商業(yè)化的人21號染色體的長臂2區(qū)2帶的原位雜交探針與正常人和患者的染色體進

3、行原位雜交?！　〗Y論：本研究建立的雙色實時熒光定量PCR能夠正確區(qū)分21三體和正常人的DSCR1基因劑量，是唐氏綜合征的一個可行的快速、準確、高通量、費用較為低廉的檢測方法。進一步擴大樣本量，得出準確的變異范圍后，該法可以應用到唐氏綜合征的診斷和產前診斷中。熒光原位雜交也是一個準確的檢測方法，尤其是當他可以直接應用于外周血或是羊水的細胞滴片時，此法也是一個快速的方法，但是用商業(yè)化的原位雜交探針費用較高，大量應用還存在一定的困難?！　?/p>