雷諾嗪后處理對(duì)再灌注心肌的保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制.pdf

1、第一部分雷諾嗪后處理對(duì)大鼠離體缺血再灌注心肌的保護(hù)效應(yīng) 目的：觀察不同濃度雷諾嗪后處理對(duì)大鼠離體缺血再灌注心肌的保護(hù)效應(yīng)，并與雷諾嗪預(yù)處理比較。 方法：48只SD大鼠，隨機(jī)分成持續(xù)灌注組(C組)，缺血再灌注組(I/R組)，雷諾嗪20μmol/L 預(yù)處理組(RPreC組)，雷諾嗪5μmol/L后處理組(RPostC1組)，雷諾嗪10μmol/L后處理組(RPostC2組)，雷諾嗪20pmol/L后處理組(RPostC3組)

2、，每組8只，建立大鼠離體心臟Langendorff灌注模型，記錄實(shí)驗(yàn)過程中心功能指標(biāo)：心率(HR)、左室發(fā)展壓(LVDP(LVSP-LVEDP))、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升/下降速率(±dp/dtmax)以及冠脈流量(CF)的變化。平衡末，再灌注末測(cè)冠脈流液中肌酸激酶(CK)，乳酸脫氫酶(LDH)，心肌肌鈣蛋白Ⅰ(CTnⅠ)的活性。 結(jié)果：缺血前雷諾嗪使HR、LNDP、±dp/dtmax輕微下降，但與其余各組

3、無顯著性差異(P>0.05)。再灌注60min時(shí)，所有雷諾嗪處理組各心功能指標(biāo)，CF改善，優(yōu)于I/R組(P<0.05)，RPostC3組與RPreC組心功能指標(biāo)，CF改善更顯著，優(yōu)于RPostC1組和RPostC2組(P<0.05)。RPostC3組與RpreC間無顯著性差異(P>0.05)。再灌60min時(shí)冠脈流液CK、LDH、CTnI的改變與心功能，CF的改變相一致。 結(jié)論：雷諾嗪≤20μmol/L對(duì)正常大鼠心肌心功能及CF

4、無影響；雷諾嗪后處理對(duì)大鼠離體缺血再灌注心肌有保護(hù)效應(yīng)，并呈濃度依賴性；雷諾嗪20μmol/L的心肌保護(hù)效應(yīng)可與雷諾嗪預(yù)處理媲美。 第二部分雷諾嗪后處理對(duì)大鼠離體缺血再灌注心肌保護(hù)效應(yīng)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究。 目的：探討雷諾嗪對(duì)離體大鼠缺血再灌注心肌保護(hù)效應(yīng)的機(jī)制。 方法：48只SD大鼠，隨機(jī)分為缺血/再灌注組(I/R組)、20μmol/L雷諾嗪后處理組(RPost組)，雷諾嗪加wortmannin(P13K的特異性抑制

5、劑)組(RW組)，雷諾嗪加PD98059(ERK1/2的特異性抑制劑)組(RP組)，雷諾嗪加atractyloside(mPTP開放劑)組(RA組)，wortmannin組(W組)，PD98059組(P組)，atractyloside組(A組)，每組6只，大鼠離體心臟行Langendor罐流。于再灌注15min時(shí)測(cè)冠脈流液CK、LDH、CTnT含量，測(cè)左室心肌組織AKT、ERK1/2的磷酸化、線粒體mPTP開放程度。I/R組、RPost

6、組、RW組、RP組、RA組各組隨機(jī)選擇一只大鼠，于再灌注60min時(shí)取心尖組織作透射電鏡(transmissionelectron microscope，TEM)觀察其超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：再灌注15min后W、P、A與RA組各組的CK、LDH和CTnI活性與I/R組無顯著性差異(P>0.05)。RW與RP組CK、LDH和CTnI活性低于RA和I/R組(P<0.05)，高于RPost組(P<0.05)。mPTP開放程度，透射電鏡圖象

7、，AKT，ERK1/2磷酸化(RA組除外)的變化與生化指標(biāo)變化相一致。RA組心肌組織AKT,ERK1/2的磷酸化與RPostC組無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：雷諾嗪后處理模擬缺血后處理的心肌保護(hù)效應(yīng)，減輕心肌缺血再灌注損傷，與激活P13K-AKT、ERK1/2途徑和抑制mPTP開放有關(guān)；雷諾嗪可能還通過RISK途徑(即P13K-AKT和ERK1/2途徑)外其他機(jī)制保護(hù)心??；mPTP位于P13K-AKT，ERK1/2途徑下

8、游；P13K-AKT，ERK1/2途徑間可能存在交通。 第三部分雷諾嗪后處理對(duì)大鼠離體缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡與mPTP關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究。 目的：探討雷諾嗪后處理是否通過抑制mPTP開放對(duì)大鼠離體缺血再灌注損傷心肌有抗凋亡作用。 方法：18只SD大鼠，隨機(jī)分為三組，缺血再灌注組(I/R組，n=5)、20μmol/L雷諾嗪后處理組(RPostC組，n=4)、雷諾嗪加atractyloside(mPTP開放劑)組(RA組

9、，n=5)和atractyloside組(A組，n=4)。建立Langendorff離體心臟灌流模型，用TUNEL法檢測(cè)再灌注末心肌凋亡，并計(jì)算凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)，測(cè)n1I)TP開放程度。 結(jié)果：與IR組相比，RPostC組心肌中凋亡細(xì)胞(TUNEL陽性細(xì)胞)減少(P<0.05)。RA組，A組凋亡細(xì)胞與IR組無差異(P>0.05)。凋亡指數(shù)，mPTP開放程度與凋亡細(xì)胞變化相一致。 結(jié)論：雷諾