缺血后處理對大鼠缺血再灌注心肌的保護作用及機制研究.pdf

1、目的： 研究缺血后處理(I-postC)對大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌鈣網(wǎng)蛋白(CRT)及其下游鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)信號途徑的影響，探討I-postC保護I/R心肌的機制。 方法： 1.通過阻斷左冠狀動脈前降支(LAD)血流致心肌缺血45 min，然后恢復血液灌注24 h建立Wistar大鼠在體心肌I/R模型； 2.實驗分組：隨機分為6組(n=8) (1)假手術(shù)(Sham)組：開胸暴露心臟后

2、穿線但不結(jié)扎LAD； (2)缺血/再灌注(I/R)組：心肌缺血45 min，再灌注24 h結(jié)束實驗； (3)缺血后處理(I-postC)組：心肌缺血45 min后，再灌注30 s，缺血30 s，反復3輪，然后再灌注24 h結(jié)束實驗； (4)CsA+I/R組：每日灌胃給予CaN抑制劑環(huán)孢霉素A(CsA)25mg/kg，連續(xù)3天后按I/R組程序操作； (5)CsA+I-postC組：每日灌胃給予CsA 25

3、mg/kg，連續(xù)3天后按I-postC組程序操作； (6)缺血預處理(IPC)組：心肌缺血5 min，再灌注5 min，反復3輪，而后按I/R組程序操作。 3.以心功能軟件檢測血流動力學； 4.以TTC法和TUNEL法分別檢測心肌梗死面積和細胞凋亡； 5.采用全自動生化分析儀測定血漿乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK-MB)活性； 6.發(fā)色底物法測定心肌CaN活性； 7.免疫印跡法檢測心

4、肌組織CaN和CRT蛋白表達。 結(jié)果： 1.I-postC改善I/R所致的左心功能下降，+dp/dtmax、-dp/dtmax分別較I/R組高58.6％和52.9％，左室舒張末壓(LVEDP)較I/R組低21.8％，心肌梗死范圍縮小(較I/R組低51.6％)，LDH和CK-MB漏出減少(分別較I/R組低37.6％和34.3％)，細胞凋亡率降低(較I/R組低74.3％)，并顯著抑制I/R誘導的心肌組織CaN活性升高(較I/

5、R組低28.3％)及CaN和CRT表達上調(diào)(分別較I/R組低32.0％和30.4％)，RCRT表達與CaN活性存在明顯的正相關(guān)性。 2.CAN抑制劑CsA顯著縮小I/R所致的心肌梗死面積，抑制細胞凋亡，但其對心肌細胞凋亡的抑制作用弱于I-postC，且兩者聯(lián)合應用并未產(chǎn)生更強的心肌保護效應：CsA對+dp/dtmax、-dp/dtmax和LVEDP無明顯改善，與I/R組比較無統(tǒng)計學意義。 3.IPC顯著縮小I/R所致的心