全氟碳載藥納米顆粒診治血管內(nèi)膜增生實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的：再狹窄是影響動(dòng)脈重建術(shù)，如球囊成形術(shù)、支架植入或旁路轉(zhuǎn)流術(shù)后遠(yuǎn)期通暢率的重要原因，其病理基礎(chǔ)是血管平滑肌細(xì)胞過度增殖和向內(nèi)膜移行、細(xì)胞外基質(zhì)沉積以及血管重塑。目前普遍認(rèn)為抑制平滑肌增殖是預(yù)防再狹窄的主要策略。本項(xiàng)研究旨在構(gòu)建一種新型納米載體，以全氟碳(Perfluorocarbon， PFC)為核心，包被抗內(nèi)膜增生藥物地塞米松(Dexamethasone)和磁共振造影劑(Gd-DIPA)，攜帶抗組織因子抗體(anti-T

2、F Ab)作為分子探針。探討全氟碳復(fù)合納米顆粒的表觀特征、納米載體攜帶地塞米松體外釋放特點(diǎn)、全氟碳納米載藥顆粒對(duì)體外培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)影響，以及作為磁共振分子影像造影劑觀察球囊損傷兔主動(dòng)脈內(nèi)膜增生的可行性。 方法和結(jié)果：本項(xiàng)研究共分3個(gè)部份：第一部份，采用高壓均質(zhì)方法構(gòu)建生物素化全氟碳載藥納米顆粒，分析其表觀特征，在體外溶出條件下通過高效液相技術(shù)分析納米載藥的釋放特點(diǎn)。結(jié)果表明：載藥納米顆粒根據(jù)所含全氟碳濃度不同，粒徑在165n

3、m～312nm之間；zeta電位在6mv～43mv之間，其中濃度30％全氟碳納米顆粒無論荷載地塞米松磷酸鈉或醋酸地塞米松，zeta電位都超過30mv。荷載水溶性地塞米松磷酸鈉包封率在57.3％～83.6％之間，并有一定突釋現(xiàn)象，首日釋放比率在66.3％～86.4％之間。而荷載脂溶性醋酸地塞米松能達(dá)到相對(duì)較高藥物包封率(92.7％～98.5％)，首日釋放比率在18.9％～26.3％，體外釋放時(shí)間持續(xù)1w。因此，比較而言，全氟碳納米顆粒荷載

4、水溶性藥物有較明顯突釋現(xiàn)象，有利于需要首劑加強(qiáng)的藥物治療，而脂溶性藥物可以保持較長(zhǎng)的緩釋作用，提高藥物的生物利用效率。第二部份，采用細(xì)胞增殖、凋亡和移行能力等檢測(cè)方法，觀察載藥納米顆粒對(duì)體外培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。細(xì)胞增殖采用CCK-8試劑盒，細(xì)胞凋亡采用annexin V凋亡試劑盒和流式細(xì)胞技術(shù)，血管平滑肌細(xì)胞移行采用transwell小室檢測(cè)方法。結(jié)果表明：地塞米松磷酸鈉對(duì)血管平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制呈劑量依賴性。全氟碳納米顆粒攜帶地塞

5、米松磷酸鈉對(duì)平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，晚期凋亡細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞相對(duì)生長(zhǎng)比率分別為6.1％±2.8％和0.782±0.069，與相同濃度游離藥物處理相比(1.6％±0.4％和1.105±0.036)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。NP-DXP和DXP處理平滑肌細(xì)胞，兩組細(xì)胞遷移數(shù)量分別為25.8±2.5和47.3±2.6，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。而構(gòu)成載藥納米顆粒核心的全氟碳對(duì)平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)無影響。因此，雖然全氟碳載藥納米顆粒

6、和單純藥物對(duì)SMC增殖和移行都有明顯抑制作用，但前者作用更加明顯，這可能與納米載藥系統(tǒng)能與細(xì)胞更緊密結(jié)合，促進(jìn)藥物對(duì)細(xì)胞作用有關(guān)。第三部份，首先建立新西蘭白兔球囊損傷腹主動(dòng)脈內(nèi)膜增生模型，用已構(gòu)建完成的生物素化全氟碳載藥納米顆粒，通過親合素-生物素免疫橋接方法，組成帶anti-TF Ab的分子影像造影劑，通過磁共振觀察動(dòng)脈內(nèi)膜增生的可行性，及其與同期超聲檢查進(jìn)行比較，分析兩種血管內(nèi)膜增生檢查方式的影像特點(diǎn)。結(jié)果表明：采用球囊損傷方法結(jié)合

7、高脂飼料喂養(yǎng)6w，腹主動(dòng)脈內(nèi)膜出現(xiàn)明顯內(nèi)膜增生，內(nèi)膜/中膜比率為2.186±0.14，與對(duì)照組相比(0.956±0.07)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。全氟碳載藥納米顆粒攜帶順磁性造影劑釓噴酸葡胺，可以增加后者的信號(hào)強(qiáng)度約16％。采用攜帶抗組織因子全氟碳載藥納米乳液，通過磁共振可以觀察到內(nèi)膜增生組織，與傳統(tǒng)血池造影劑方法和超聲診斷相比，影像敏感性明顯提高。同時(shí)通過對(duì)照組觀察，載藥納米分子影像造影劑具有組織結(jié)合特異性。 結(jié)論

8、：高壓均質(zhì)法構(gòu)建的全氟碳載藥納米顆粒，表觀特征符合設(shè)計(jì)要求。提高全氟碳構(gòu)成比可以增加納米載藥的包封率和載藥緩釋能力，但也會(huì)增加納米粒徑。全氟碳納米荷載水溶性藥物有一定突釋現(xiàn)象，而荷載脂溶性藥物具有相對(duì)較高的包封率和緩釋性。全氟碳納米顆粒荷載地塞米松磷酸鈉對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖、移行有明顯抑制作用，效果優(yōu)于游離藥物。全氟碳納米可以增加磁共振造影劑的信號(hào)強(qiáng)度，提高磁共振檢測(cè)敏感性，可以通過磁共振獲得球囊損傷造成的兔主動(dòng)脈內(nèi)膜增生影像，具有特異