雌激素對(duì)不同ER狀態(tài)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)性狀的影響及與FAK的關(guān)系.pdf

1、背景： 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤的首位。近年來，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，發(fā)病年齡也明顯年輕化，嚴(yán)重威脅著婦女的健康。 雌激素(estrogen,E2)在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，在對(duì)人類乳腺癌細(xì)胞所做的實(shí)驗(yàn)中，可見雌激素可增強(qiáng)乳腺癌的侵襲性，并直接或間接促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖。 近年來，整合蛋白介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的中心分子.黏著斑激酶(focaladhesionkinase，F(xiàn)A

2、K)的研究備受重視。FAK是細(xì)胞漿內(nèi)非受體酪氨酸激酶，其磷酸化激活是細(xì)胞生長和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑中重要環(huán)節(jié)。近年來研究發(fā)現(xiàn)它與細(xì)胞的黏附、增殖、遷移及凋亡密切相關(guān)，有胞內(nèi)第一信號(hào)之稱，因此日益受到關(guān)注。研究表明，在許多腫瘤組織中都有FAK表達(dá)增加，乳腺癌組織中FAK的表達(dá)及活性明顯升高，而一般增生和正常乳腺組織中均未見表達(dá)，F(xiàn)AK能加速惡性細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移。 雌激素可在胞漿內(nèi)經(jīng)非基因組途徑通過激活細(xì)胞漿內(nèi)的酪氨酸激酶通路來

3、調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。而FAK也是生長因子酪氨酸激酶通路中的一環(huán)。研究發(fā)現(xiàn)，在一系列三苯氧胺耐藥乳腺癌細(xì)胞系中，F(xiàn)AK活性增加，再用雌激素處理后，F(xiàn)AK活性進(jìn)一步增加。雌激素受體(estrogenreceptor,ER)可與FAK結(jié)合，雌激素可調(diào)節(jié)FAK的自動(dòng)磷酸化，應(yīng)用FAK/Src阻斷劑可防止或延緩ER陽性乳腺癌的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移。以上證據(jù)說明雌激素及FAK均在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 目前國內(nèi)外關(guān)于雌激素和FAK的相關(guān)性報(bào)道不多

4、，本實(shí)驗(yàn)采用體外研究方法，觀察不同濃度雌激素刺激后不同雌激素受體狀態(tài)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)性狀的改變及FAK的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平，以進(jìn)一步了解雌激素及FAK在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用，為今后乳腺癌治療的新靶點(diǎn)提供理論支持。 目的： 檢測(cè)不同濃度雌激素作用后不同雌激素受體(ER)狀態(tài)的乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移及FAK的表達(dá)情況，探討雌激素與FAK是否通過同一信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移及雌激素與FAK是否存在反饋關(guān)系。

5、 方法： 采用體外研究方法，觀察不同濃度雌激素刺激后不同雌激素受體狀態(tài)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)性狀及FAK的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同濃度雌激素處理后腫瘤細(xì)胞的存活率并選取適宜雌激素濃度以進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)；rranswell法測(cè)定不同濃度雌激素處理后腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力；實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)不同濃度雌激素處理后腫瘤細(xì)胞中FAK基因的轉(zhuǎn)錄水平；WesternBlot檢測(cè)不同濃度雌激素處理后腫瘤細(xì)胞中FAK基因的表達(dá)水平。綜合

6、分析雌激素及FAK在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及相互之間關(guān)系。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組間差異用單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)、SNK-q檢驗(yàn)，多樣本方差齊性檢驗(yàn)用Levene法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.本研究結(jié)果顯示，在一定范圍內(nèi)，雌激素對(duì)MCF-7細(xì)胞具有促生長作用，到達(dá)1×10-9mol/L對(duì)MCF-7細(xì)胞的促生長作用進(jìn)入平臺(tái)期；而任何濃度的雌激素對(duì)

7、MDA-MB-231細(xì)胞均無促生長作用。并篩選出后續(xù)實(shí)驗(yàn)的雌激素濃度分別為：0mol/L;1×10-11mol/L;1×10-10mol/L；1×10-9mol/L。 2.隨雌激素濃度的逐漸升高，MCF-7細(xì)胞侵入濾膜的數(shù)量也逐漸增多，對(duì)照組與各處理組之間及各處理組兩兩之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；不同濃度雌激素處理后，不同處理組MDA-MB-231細(xì)胞侵入濾膜的數(shù)量與對(duì)照組比較無明顯差異(P＞0.05)，各處理組之間

8、的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3.RT-PCR試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨雌激素濃度逐漸升高，MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中FAK基因表達(dá)并未相應(yīng)提高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.WesternBlot檢測(cè)結(jié)果顯示，隨雌激素濃度逐漸提高，MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞FAK基因的蛋白表達(dá)并未隨之升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論： 雌激素可促進(jìn)ER陽性乳腺癌細(xì)胞