小麥醇溶蛋白載體材料及其肝靶向給藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、靶向給藥系統(tǒng)載體材料一直吸引著醫(yī)藥工作者的極大興趣。其中納米粒子以其特有的優(yōu)點更是近年來國內(nèi)外一個極為重要的研究熱點。目前己報道用于制備納米粒子靶向藥物系統(tǒng)的載體材料包括：合成的可生物降解的高分子聚合物體系和天然高分子體系。前者如聚a-氰基丙烯酸烷酯、聚乙烯醇、聚乳酸、聚乳酸．乙醇酸共聚物等；后者如白蛋白、明膠、多糖等。而近年，植物來源的高分子蛋白類材料在制備納米靶向給藥系統(tǒng)方面顯示出更大的優(yōu)勢，植物源蛋白具有能夠包埋多種活性物質(zhì)、不會

2、被朊病毒(Prion)所污染、藥理惰性和無毒等優(yōu)點，有望成為合成類聚合物的優(yōu)良替代品。 本課題擬制備一種新型植物源蛋白載體材料小麥醇溶蛋白并進行藥物包載研究，以求開發(fā)出一種新型靶向給藥系統(tǒng)的載體材料。課題主要分為以下幾個部分進行：小麥醇溶蛋白載體材料的提取純化與相關(guān)性質(zhì)研究；小麥醇溶蛋白載體材料的生物安全性初步評價；小麥醇溶蛋白納米粒的制備及包裹不同性質(zhì)藥物的研究；水飛薊賓小麥醇溶蛋白納米粒的制備工藝及制劑學(xué)性質(zhì)研究；水飛薊賓小

3、麥醇溶蛋白納米粒大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究及小鼠體內(nèi)組織分布研究。 首先，以脫脂前后重量及脫脂溶劑吸收值的變化為指標(biāo)，通過單因素考察，最終確定了小麥面筋粉的脫脂工藝；以蛋白提取率為指標(biāo)，確定了小麥醇溶蛋白的提取工藝；通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測小麥醇溶蛋白分子量組成，確定了純化工藝；同時對小麥醇溶蛋白的溶解性，蛋白分子量組成進行了考察。結(jié)果通過最佳提取純化工藝得到的小麥醇溶蛋白為白色結(jié)晶狀固體粉末，電泳顯示其分子量組

4、成為45-30kD，為一組結(jié)構(gòu)相近的蛋白質(zhì)，易溶于70％乙醇溶液，在水及其他有機溶劑中的溶解度急劇下降。其次，對得到的小麥醇溶蛋白進行生物安全性的初步評價。以ECV-304臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為模型，采用MTI’法考察了小麥醇溶蛋白的細(xì)胞毒性；按照美國藥典醫(yī)藥用輔料的安全性評價方法對小麥醇溶蛋白的溶血及初步的血液相容性進行考察研究；以小鼠為模型，考察了小麥醇溶蛋白的急性毒性。結(jié)果小麥醇溶蛋白不同濃度浸提液和二甲亞砜溶液對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的毒性為

5、0級和1級，細(xì)胞的生長狀況良好，形態(tài)未見異常。表明小麥醇溶蛋白對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞無毒性作用。小麥醇溶蛋白的血液相容性良好，具有較弱的抗凝作用，溶血率為2.11％。急性毒性實驗結(jié)果表明其LD<,50>值為96.7586 mg/ml(1.935g/kg)，95％可信限C.L=106.3950-87.9352 mg/ml。 以小麥醇溶蛋白為載體材料制備空白納米粒，并對制備工藝進行了初步考察；通過方法學(xué)考察確定了以沉淀法測定載藥納米粒的包

6、封率、載藥量；分別選擇三種不同性質(zhì)的中藥抗肝炎有效成分水飛薊素、淫羊藿苷及胡黃連苷Ⅱ進行包裹實驗。通過試驗結(jié)果分析，小麥醇溶蛋白載體材料可采用去溶劑化法制備載藥納米粒，形成的納米粒內(nèi)部為醇溶蛋白疏水基團組成的疏水內(nèi)核，因此可以為脂溶性藥物提供包載空間，藥物結(jié)合或以疏水鍵吸附于納米粒疏水內(nèi)核中，而對于水溶性藥物包載效果較差，藥物主要以表面吸附的形式存在于納米粒表面。因此，小麥醇溶蛋白對水飛薊素的包裹效果較好，可以達(dá)到78.85％±7.53

7、％的平均包封率。 對于該載體材料的研究本課題最終選擇抗肝炎有效單體成分水飛薊賓為模型藥物制備載藥納米粒，采用星點設(shè)計．效應(yīng)面法優(yōu)化SN-GNPs的制備工藝，以包封率(entrapment efficiency,EE％)、載藥量(dug loading，DL％)及綜合指標(biāo)(Overall desirability，OD)OD值為評價指標(biāo)，確定了藥物/載體比、乳化劑濃度及穩(wěn)定劑用量等三個顯著因素的最佳值。采用最佳工藝制備的SN-GN

8、Ps粒徑、包封率、載藥量分別為164.9nm、68.95％、4.79％。以外觀、色澤、再分散性等為指標(biāo)，優(yōu)選了SN-GNPs凍干劑的處方，最終選擇3％Glu與2％Man搭配使用為SN-GNPs的凍干支架劑。SN-GNPs體外釋放實驗結(jié)果表明，載藥納米粒在釋放介質(zhì)中的釋放行為與空白藥物相比呈現(xiàn)明顯的緩釋效果。以水飛薊賓注射液為參比制劑，考察了SN-GNPs在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)。采用DAS2.0軟件對測定結(jié)果進行處理，確定最佳房室模型，通過房

9、室模型及統(tǒng)計矩法求算藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明，SN注射液及SN-GNPs在大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程均符合二室模型。對主要的藥動學(xué)參數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)檢驗，結(jié)果表明飛薊賓小麥醇溶蛋白納米粒與對照藥相比具有延長體內(nèi)平均滯留時間的作用，表明SN-GNPs具有一定緩釋的作用。 選用小鼠為動物模型，考察了靜注SN及SN-GNPs的體內(nèi)分布特征，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果表明，SN-GNPs給藥后與SN對照藥物相比，延長了水飛薊賓在肝中的滯留時間，增加了藥物的肝臟分

10、布，具有一定的肝靶向性。 本課題制備了可作為血管內(nèi)靶向給藥系統(tǒng)載體材料的小麥醇溶蛋白，并首次對其作為血管內(nèi)給藥材料進行了安全性的初步評價，選用不同藥物考察了小麥醇溶蛋白作為載體所適合包裹的藥物性質(zhì)及載藥機理，最終選用抗肝炎單體成分水飛薊賓進行包載研究，并進行了體內(nèi)外的相關(guān)評價，證實小麥醇溶蛋白作為新型給藥系統(tǒng)載體材料的可行性。國內(nèi)外未見相關(guān)報道。本課題為靶向給藥提供了新的天然高分子材料，豐富載體材料的研究內(nèi)容，具有一定的實用性和