BMP-15對子宮內(nèi)膜異位癥患者卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響.pdf

1、目的：⑴明確骨形態(tài)發(fā)生蛋白-15(Bone Morphogenetic Protein-15 BMP-15)在子宮內(nèi)膜異位癥患者和單純男性重度少弱精不孕或者單純輸卵管梗阻無超聲下可見積水患者中表達(dá)量的差異,以及BMP-15對卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響以及在不孕癥中所起的作用。⑵子宮內(nèi)膜異位癥患者卵母細(xì)胞的卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率對卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響及其作用途徑。
　　 方法：①選取2009年6月至2010年11月于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院

2、生殖中心就診的不孕患者,經(jīng)腹腔鏡檢查或卵巢囊腫穿刺術(shù)確診為子宮內(nèi)膜異位癥的85例患者納入內(nèi)異癥組,單純男性重度少弱精不孕或者單純輸卵管梗阻無超聲下可見積水的88例患者為對照組。②臨床所有入選患者均記錄年齡、獲卵數(shù)、正常受精數(shù)、正常卵裂數(shù)、優(yōu)胚數(shù),并隨訪臨床妊娠情況。③取卵時收集入選患者不含血的卵泡液于EP管中,離心去除細(xì)胞等有形成分,采用Western blot方法測定內(nèi)異癥組和對照組患者卵泡液中BMP-15的表達(dá)量。④留取取卵日剝除的

3、成熟卵母細(xì)胞周圍的卵丘顆粒細(xì)胞于EP管中,離心棄上清；加入透明質(zhì)酸酶處理顆粒細(xì)胞后,FITC及PI雙染色顆粒細(xì)胞；避光處理后,采用流式細(xì)胞儀分析兩組患者卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡率。⑤留取取卵日剝除的成熟卵母細(xì)胞周圍的卵丘顆粒細(xì)胞于EP管中,離心棄上清,將顆粒細(xì)胞保存于-80℃冰箱內(nèi),待實驗日解凍所有顆粒細(xì)胞,采用Trizol法分別提取每例標(biāo)本的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用Real time PCR法檢測顆粒細(xì)胞糖代謝基因PFKP mRNA

4、及LDHA mRNA的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：內(nèi)異癥患者85例,平均獲卵數(shù)(8.2±5.6)個,優(yōu)胚率(37.6±33.2)％,而對照組患者88例,平均獲卵數(shù)及優(yōu)胚率分別為(11.9±5.8)個,(48.0±31.4)％,內(nèi)異癥組患者平均臨床獲卵數(shù)及優(yōu)胚率均較對照組低,兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異性(P<0.05)。內(nèi)異癥組獲卵率、受精率及卵裂率分別為(72.4±28.3)％、(65.3±24.7)％、(98.8±5.7)％；對照組獲卵率、

5、受精率及卵裂率分別為(73.4±22.9)％、(67.4±21.0)％、(99.4±5.4)％,兩組患者獲卵率、受精率及卵裂率差異無顯著性(P>0.05)。85例內(nèi)異癥組患者中有33例獲得臨床妊娠,臨床妊娠率為38.8％；88例對照組中未受精有2例,4例因OHSS取消移植,1例因子宮內(nèi)膜息肉取消移植,1例因子宮肌瘤取消移植,1例因內(nèi)膜薄取消移植,4例因孕酮升高未移植。剩余75例患者中有40例獲得臨床妊娠,臨床妊娠率為53.5％.內(nèi)異組患

6、者臨床妊娠率較對照組低14.7％,但差異無顯著性(P=0.067)。采用western-blot法檢測卵泡液中BMP-15的表達(dá)量,13例內(nèi)異癥組患者卵泡液中BMP-15表達(dá)量(0.67±0.18),13例對照組患者卵泡液中BMP-15表達(dá)量為(0.94±0.33),內(nèi)異癥組較對照組低,兩者相比具有統(tǒng)計學(xué)差異性(P<0.05)。流式細(xì)胞儀分析6例內(nèi)異組患者卵丘顆粒細(xì)胞早期凋亡率為(37.82±15.81)％,6例對照組患者卵丘顆粒細(xì)胞早

7、期凋亡率為(8.85±5.58)％,兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)差異性(P<0.05)。15例內(nèi)異癥組患者顆粒細(xì)胞PFKP mRNA的相對量為(1.22±0.63),LDHA mRNA的相對量為(1.22±0.60),12例對照組患者顆粒細(xì)胞PFKP mRNA的相對量為(0.96±0.19),LDHA mRNA的表相對量為(0.97±0.29),內(nèi)異癥組患者顆粒細(xì)胞PFKP mRNA的相對量和LDHA mRNA的相對量均較對照組高,但兩者之間差異