骨髓基質(zhì)細胞復合PLGA-β-TCP修復犬下頜骨節(jié)段缺損的實驗研究.pdf

1、目的：本研究以骨髓基質(zhì)細胞為種子細胞，制備聚乳酸乙酸交酯/β-磷酸三鈣(PLGA/β-TCP)多孔復合材料，并以其為支架，評價BMSCs/PLGA/β-TCP修復下頜骨缺損的潛能，為將來運用于臨床下頜骨缺損修復提供新的途徑。
　　 方法：1、PLGA按L-LA：GA=70:30(摩爾比)聚合，紅外光譜、磁譜共振氫譜分析后復合β-TCP(PLGA：β-TCP=6:4，質(zhì)量比)，以NaCl為致孔劑的溶液澆鑄/粒子瀝濾技術制備PLGA

2、/β-TCP多孔復合支架，比重法測定孔隙率，電鏡下觀察支架材料表面和孔隙內(nèi)BMSCs附著情況。
　　 2、犬股骨骨髓穿刺，用密度梯度離心法分離、獲取BMSCs，體外培養(yǎng)增殖，成骨誘導劑誘導分化后，進行成骨細胞表型鑒定。取成年比格犬6只，隨機分成實驗組和對照組，各3只。以成骨誘導后的BMSCs為種子細胞，PLGA/β-TCP為支架，建立犬單側下頜骨3cm節(jié)段缺損模型，實驗組植入BMSCs/PLGA/β-TCP復合體；對照組植入PL

3、GA/β-TCP；在術后4周、12N、24周處死動物，分別進行影像學、大體標本、組織學觀察骨缺損區(qū)修復效果。
　　 結果：1、PLGA/β-TCP多孔復合支架的孔隙率約為85％，孔徑在150μm～300μm之間；SEM顯示BMSCs可在該支架內(nèi)生長繁殖。
　　 2、用密度梯度梯度離心法結合貼壁法成功分離并獲得BMSCs，體外培養(yǎng)并成骨誘導后，堿性磷酸酶染色、鈣結節(jié)茜素紅染色、BGP細胞免疫化學和免疫熒光均陽性。
　

4、　 3、犬下頜骨節(jié)段缺損模型：①術后4周，CT掃描實驗組有新生骨組織形成，對照組無成骨影像；組織學觀察實驗組見支架材料均有不同程度的降解，可見大量成骨細胞、破骨細胞及軟骨細胞，對照組見異物巨細胞和炎性細胞浸潤；OPN免疫組化實驗組陽性表達，對照組無表達。②術后12周，CT掃描實驗組充滿密質(zhì)骨影像，對照組密度較4周時減低；HE染色，實驗組見骨島形成、周圍成骨細胞增生活躍、支架材料進一步降解，對照組有大量纖維結締組織形成、支架降解不如實驗

5、組明顯；OPN免疫組化實驗組更多細胞陽性表達，對照組無表達；③術后24周，CT掃描實驗組缺損區(qū)中央有松質(zhì)骨形成、周圍骨皮質(zhì)包繞，對照組為軟組織影像；HE染色，實驗組形成較成熟骨組織、骨髓腔隙，支架材料完全降解，對照組缺損部分呈纖維性愈合。
　　 結論：1、PLGA/β-TCP多孔復合支架是一種良好的骨組織工程支架材料。
　　 2、BMSCs可以作為骨組織工程的種子細胞。
　　 3、經(jīng)成骨誘導的BMSCs復合PLG