骨髓基質(zhì)細(xì)胞復(fù)合PLGA-β-TCP修復(fù)犬下頜骨節(jié)段缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究以骨髓基質(zhì)細(xì)胞為種子細(xì)胞，制備聚乳酸乙酸交酯/β-磷酸三鈣(PLGA/β-TCP)多孔復(fù)合材料，并以其為支架，評價(jià)BMSCs/PLGA/β-TCP修復(fù)下頜骨缺損的潛能，為將來運(yùn)用于臨床下頜骨缺損修復(fù)提供新的途徑。
　　 方法：1、PLGA按L-LA：GA=70:30(摩爾比)聚合，紅外光譜、磁譜共振氫譜分析后復(fù)合β-TCP(PLGA：β-TCP=6:4，質(zhì)量比)，以NaCl為致孔劑的溶液澆鑄/粒子瀝濾技術(shù)制備PLGA

2、/β-TCP多孔復(fù)合支架，比重法測定孔隙率，電鏡下觀察支架材料表面和孔隙內(nèi)BMSCs附著情況。
　　 2、犬股骨骨髓穿刺，用密度梯度離心法分離、獲取BMSCs，體外培養(yǎng)增殖，成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)分化后，進(jìn)行成骨細(xì)胞表型鑒定。取成年比格犬6只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組，各3只。以成骨誘導(dǎo)后的BMSCs為種子細(xì)胞，PLGA/β-TCP為支架，建立犬單側(cè)下頜骨3cm節(jié)段缺損模型，實(shí)驗(yàn)組植入BMSCs/PLGA/β-TCP復(fù)合體；對照組植入PL

3、GA/β-TCP；在術(shù)后4周、12N、24周處死動(dòng)物，分別進(jìn)行影像學(xué)、大體標(biāo)本、組織學(xué)觀察骨缺損區(qū)修復(fù)效果。
　　 結(jié)果：1、PLGA/β-TCP多孔復(fù)合支架的孔隙率約為85％，孔徑在150μm～300μm之間；SEM顯示BMSCs可在該支架內(nèi)生長繁殖。
　　 2、用密度梯度梯度離心法結(jié)合貼壁法成功分離并獲得BMSCs，體外培養(yǎng)并成骨誘導(dǎo)后，堿性磷酸酶染色、鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色、BGP細(xì)胞免疫化學(xué)和免疫熒光均陽性。
　

4、　 3、犬下頜骨節(jié)段缺損模型：①術(shù)后4周，CT掃描實(shí)驗(yàn)組有新生骨組織形成，對照組無成骨影像；組織學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)組見支架材料均有不同程度的降解，可見大量成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞，對照組見異物巨細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤；OPN免疫組化實(shí)驗(yàn)組陽性表達(dá)，對照組無表達(dá)。②術(shù)后12周，CT掃描實(shí)驗(yàn)組充滿密質(zhì)骨影像，對照組密度較4周時(shí)減低；HE染色，實(shí)驗(yàn)組見骨島形成、周圍成骨細(xì)胞增生活躍、支架材料進(jìn)一步降解，對照組有大量纖維結(jié)締組織形成、支架降解不如實(shí)驗(yàn)

5、組明顯；OPN免疫組化實(shí)驗(yàn)組更多細(xì)胞陽性表達(dá)，對照組無表達(dá)；③術(shù)后24周，CT掃描實(shí)驗(yàn)組缺損區(qū)中央有松質(zhì)骨形成、周圍骨皮質(zhì)包繞，對照組為軟組織影像；HE染色，實(shí)驗(yàn)組形成較成熟骨組織、骨髓腔隙，支架材料完全降解，對照組缺損部分呈纖維性愈合。
　　 結(jié)論：1、PLGA/β-TCP多孔復(fù)合支架是一種良好的骨組織工程支架材料。
　　 2、BMSCs可以作為骨組織工程的種子細(xì)胞。
　　 3、經(jīng)成骨誘導(dǎo)的BMSCs復(fù)合PLG