食管鱗癌外周血微轉(zhuǎn)移檢測及微轉(zhuǎn)移基因芯片研制.pdf

1、[目的]：通過聯(lián)合檢測中期因子(midkine MK)、△Np63在食管鱗癌患者外周血循環(huán)單個核細(xì)胞中表達(dá)，結(jié)合臨床病理資料綜合分析，探討靶基因的表達(dá)與患者臨床病理資料間的相關(guān)性；并在課題組原有的工作基礎(chǔ)上建立多重?zé)晒獠粚ΨQRT-PCR技術(shù)用于檢測食管鱗癌患者外周血微轉(zhuǎn)移，初步探索食管鱗癌微轉(zhuǎn)移基因芯片研制。 [方法]：應(yīng)用巢式RT-PCR技術(shù)聯(lián)合檢測54例食管鱗癌患者術(shù)前外周血單個核細(xì)胞MK、△Np63 mRNA表達(dá)情況，將檢

2、測結(jié)果與患者的臨床病理資料綜合分析；另取11例食管鱗癌組織為陽性對照，10例非腫瘤患者外周血為陰性對照。建立多重?zé)晒獠粚ΨQRT-PCR技術(shù)檢測食管鱗癌患者外周血微轉(zhuǎn)移；初步設(shè)計并制備微轉(zhuǎn)移芯片，并應(yīng)用多重?zé)晒獠粚ΨQRT-PCR擴(kuò)增獲得熒光單鏈DNA，雜交檢測。 [結(jié)果]：受檢的54例食管鱗癌患者外周血中MK mRNA陽性表達(dá)率61.11％(33/54)：ANp63 mRNA陽性表達(dá)率55.56％(30/54)。結(jié)合臨床病理資料綜

3、合分析，患者外周血中MK、△Np63 mRNA陽性表達(dá)與年齡、性別、細(xì)胞分化程度及臨床分期均無關(guān)，但MK陽性表達(dá)與食管鱗癌患者有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(P<0.05)；而△Np63陽性表達(dá)與腫瘤的浸潤深度里顯著相關(guān)(P<0.05)。至少一個基因檢測結(jié)果為陽性的表達(dá)率為79.63％(43/54)，且與食管鱗癌患者年齡、腫瘤的浸潤深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈顯著相關(guān)。兩個基因同時表達(dá)時特異性增強，并與患者性別、腫瘤的浸潤深度呈顯著相關(guān)。而

4、10例健康成人外周血中兩種基因則無1例出現(xiàn)陽性。11例食管鱗癌組織中MKmRNA表達(dá)率81.82％(9/11)；△Np63 mRNA陽性表達(dá)率72.73％(8/11)。設(shè)計和優(yōu)化hSTC-1、MK、△Np63,CK19、CEA引物并應(yīng)用于多重?zé)晒獠粚ΨQRT-PCR擴(kuò)增，獲得五種基因熒光單鏈DNA。初步研制含hSTC-1、MK、ANp63、CK19、CEA探針微轉(zhuǎn)移芯片。 [結(jié)論]：MK mRNA和△Np63 mRNA可作為檢測食

5、管鱗癌外周血微轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物。食管鱗癌患者術(shù)前外周血中腫瘤標(biāo)志物的陽性表達(dá)與食管鱗癌惡性生物學(xué)行為有關(guān)，提示這種方法可能有助于指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后判斷。聯(lián)合檢測腫瘤患者外周血MK mRNA與△Np63 mRNA可提高外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢出率，兩個基因同時表達(dá)特異性強。多重?zé)晒獠粚ΨQRT-PCR技術(shù)可用于多對基因的檢測，能夠滿足檢測腫瘤細(xì)胞外周血微轉(zhuǎn)移的多種腫瘤分子標(biāo)志物需要。基因芯片技術(shù)應(yīng)用于腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測大有可為，但尚需進(jìn)一步完善。