磷酸三(2-丁氧基)乙酯(TBOEP)亞慢性暴露對(duì)斑馬魚(yú)的生殖損傷和內(nèi)分泌干擾效應(yīng).pdf

1、近年來(lái)，火災(zāi)的連續(xù)發(fā)生和蔓延，對(duì)人們的生命和財(cái)產(chǎn)安全造成了巨大的損失。有機(jī)磷系阻燃劑（organophosphate flame retardants，OPFRs）作為多溴聯(lián)苯(polychorinated biphenyls，PCBs)、多溴聯(lián)苯醚(poly brominated diphenyl ethers,PBDEs)的替代品，因具有極好的阻燃效果被普遍用到電子、紡織、家裝原料、交通運(yùn)輸?shù)刃袠I(yè)中，在世界范圍內(nèi)的需求量和使用量大幅

2、度的增加。磷酸三(2-丁氧基)乙酯(Tris(2-butoxyethyl) phosphate，TBOEP)作為一種典型的有機(jī)磷阻燃劑正在被普遍的使用，而且呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)。近幾年有研究發(fā)現(xiàn)，TBOEP具有神經(jīng)、發(fā)育、內(nèi)分泌干擾、生殖等生物毒性，但是這些研究大多停留在宏觀個(gè)體水平，其潛在的微觀分子機(jī)制的相關(guān)研究依然匱乏。
　　本研究以成年斑馬魚(yú)為受試生物，探究了TBOEP對(duì)成年斑馬魚(yú)亞慢性暴露后的生殖毒性和內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。在本研

3、究中，成年的雌雄斑馬魚(yú)相互配對(duì)地暴露在濃度為0μg/L，5μg/L，50μg/L，500μg/L的TBOEP溶液中，暴露周期為21d。在暴露結(jié)束后，我們研究了TBOEP對(duì)成年斑馬魚(yú)生殖功能的影響，包括雌魚(yú)的累積產(chǎn)卵量的變化，子代胚胎的成活率和孵化率，以及胚胎的卵徑等暴露終點(diǎn)指標(biāo)，并觀察了斑馬魚(yú)性腺的病理組織學(xué)變化。我們還采用ELISA試劑盒檢測(cè)了魚(yú)體內(nèi)性激素含量的變化，實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢查了下丘腦-垂體-性腺-肝臟(Hyp

4、othalamic-pituitary-gonadal-liver, HPGL axis)上類(lèi)固醇合成相關(guān)的基因的轉(zhuǎn)錄水平的變化。主要結(jié)果如下:
　　1.在暴露結(jié)束后，TBOEP的暴露顯著地降低了雌魚(yú)的平均累積產(chǎn)卵量，在暴露最后一天子代胚胎的孵化率和成活率也顯著性降低，同時(shí)，卵徑也顯著性地降低。
　　2.性腺的病理組織學(xué)切片觀測(cè)發(fā)現(xiàn)TBOEP暴露后，卵巢中不成熟的卵原細(xì)胞和卵黃前期卵母細(xì)胞的比例顯著性升高，而成熟的卵黃期卵母

5、細(xì)胞和排卵前期的卵母細(xì)胞比例顯著性下降，表明TBOEP明顯抑制了卵巢中卵母細(xì)胞的成熟;在雄魚(yú)中，精巢中不成熟精母細(xì)胞比例顯著性升高，成熟的精子細(xì)胞的比例顯著性下降，表明TBOEP明顯阻滯了雄魚(yú)的精子成熟。
　　3.雌魚(yú)和雄魚(yú)血清中雌二醇(E2)的濃度在500μg/L濃度組都顯著性的升高，而只有雄魚(yú)血清中的睪酮(T)的濃度在最高濃度組顯著性的升高，此外，雌魚(yú)體內(nèi)的T/E2比值在最高濃度組顯著性下降，雄魚(yú)的T/E2比值在最高濃度組顯著

6、性升高。
　　4.RT-PCR結(jié)果顯示，雌魚(yú)和雄魚(yú)HPGL軸上類(lèi)固醇合成相關(guān)的基因在轉(zhuǎn)錄水平都受到了顯著地影響。其中，雌魚(yú)和雄魚(yú)腦中的基因大多數(shù)顯著性下調(diào)，只有cyp19b在雌魚(yú)和雄魚(yú)腦中都顯著性的上調(diào);雌魚(yú)和雄魚(yú)性腺中的基因大多數(shù)顯著性上調(diào)，只有cyp19a在雄魚(yú)性腺中顯著性下調(diào);雌魚(yú)肝臟中的基因都顯著性的上調(diào)。
　　這些結(jié)果表明TBOEP可以通過(guò)干擾斑馬魚(yú)HPGL軸破壞體內(nèi)的激素平衡，影響卵泡和精子的發(fā)育成熟，最終影響生