ApoE基因型和5XFAD基因背景對(duì)小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化及相關(guān)炎癥分子的影響.pdf

1、目的：
　　載脂蛋白E（ApoE）是人血漿中的重要脂蛋白之一，與脂質(zhì)代謝有密切的關(guān)系，其多態(tài)性與多種疾病有密切相關(guān)，如動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）、阿爾茲海默?。ˋlzheimer disease，AD）。本研究旨在探討有/無(wú)AD基因背景下，不同ApoE基因型對(duì)小鼠血脂、主動(dòng)脈粥樣硬化和炎癥分子ICAM-1(Intercelluar Adhesion Molecule-1）、VCAM-1（Vascular

2、Cell Adhesion Molecule-1）、MCP-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1）表達(dá)的影響,以及MAPKs信號(hào)通路在其中的可能調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　SPF級(jí)雄性、12月齡小鼠，分組：C57BL/6J對(duì)照組，ApoE基因敲除（ApoE-/-）組，ApoE2、ApoE3、ApoE4組(分別表達(dá)人 E2、E3、E4基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，ApoE-TR)，含有APP/PS15X

3、FAD基因背景的ApoE-/-/5XFAD、ApoE2/5XFAD、ApoE3/5XFAD、ApoE4/5XFAD組（ApoE-TR/5XFAD），每小組6-12只。正常飲食喂養(yǎng)12個(gè)月后處死動(dòng)物。收集血清，采用酶法檢測(cè)血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。取小鼠主動(dòng)脈（主動(dòng)脈根部至主動(dòng)脈弓）進(jìn)行冰凍連續(xù)切片，應(yīng)用蘇木素-依紅染色（HE染色）和蘇丹Ⅳ染色后，觀察和檢

4、測(cè)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織學(xué)特點(diǎn)和病變情況，Image ProPlus軟件測(cè)量血管內(nèi)膜面積；組織免疫熒光法觀察主動(dòng)脈內(nèi)炎癥分子（VCAM-1、MCP-1）表達(dá)情況。取小鼠胸腹主動(dòng)脈（自主動(dòng)脈根部至髂總動(dòng)脈分叉處），蛋白印跡法檢測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)ICAM-1、VCAM-1蛋白表達(dá)量、MAPKs（ERK、JNK、P38）表達(dá)及磷酸化水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1、血脂水平的變化：
　?。?）與對(duì)照組相比較，ApoE-/-組和A

5、poE-/-/5XFAD組血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，分別是對(duì)照組的8.3、4.9、26.1倍和19.5、5.2、31.0倍，non-HDL-C水平也明顯升高，分別為對(duì)照組的33.4倍和54.0倍(P<0.05）；
　　（2）ApoE2、ApoE2/5XFAD小鼠的TC、TG、LDL-C、non-HDL-C同樣較野生型明顯升高，是對(duì)照組的6.3、4.4、16.3、18.4倍和7.0、2.8、10.1、12.4倍(P<

6、0.05）；
　?。?）ApoE-TR組和ApoE-TR/5XFAD組中ApoE3、ApoE4兩組的血清TC、TG、LDL-C和non-HDL-C水平與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異（P>0.05）；
　?。?）與單純ApoE-/-組比較，ApoE-/-/5XFAD組TC和non-HDL-C水平明顯升高，分別為前者的2.3倍和1.6倍（P<0.05）。
　　2、動(dòng)脈粥樣硬化病變程度：
　?。?）ApoE-/-組和Apo

7、E-/-/5XFAD組的主動(dòng)脈根部動(dòng)脈粥樣硬化病變明顯，可見斑塊形成，內(nèi)膜面積較對(duì)照組有明顯增大，分別為58107.6±7339.0μm2（ApoE-/-組）、96208.6±32032.5μm2（ApoE-/-/5XFAD組） VS18819.3±2162.7μm2（對(duì)照組）（P<0.05）；
　?。?）ApoE2/5XFAD組主動(dòng)脈可見少量斑塊形成，但是分析其內(nèi)膜面積與對(duì)照組比較沒有顯著差異（40078.7±25272.5μm

8、2 VS18819.3±2162.7μm2，P>0.05）；
　?。?）無(wú)論有無(wú)AD基因背景，ApoE3、ApoE4組小鼠主動(dòng)脈未見明顯動(dòng)脈粥樣硬化病變，其內(nèi)膜面積與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　3、主動(dòng)脈炎癥分子的表達(dá)：
　?。?）主動(dòng)脈提取物ICAM-1蛋白的表達(dá)在ApoE-/-組和ApoE-/-/5XFAD組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；無(wú)論有否AD基因，ApoE-TR各組（ApoE2、ApoE3

9、、ApoE4）組和ApoE-TR/5XFAD各組（ApoE2/5XFAD、ApoE3/5XFAD、ApoE4/5XFAD）ICAM-1蛋白的表達(dá)與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異（P>0.05）；
　　（2）主動(dòng)脈提取物中VCAM-1蛋白表達(dá)在ApoE-/-組、ApoE-/-/5XFAD組和ApoE2/5XFAD組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；ApoE-TR各組（ApoE2、ApoE3、ApoE4）組和ApoE3/5XFAD、ApoE4/

10、5XFAD組VCAM-1蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異（P>0.05）；
　　（3）在主動(dòng)脈免疫熒光染色中，VCAM-1和MCP-1熒光強(qiáng)度在 ApoE-/-組、ApoE-/-/5XFAD組和ApoE2/5XFAD組增強(qiáng)。
　　4、MAPKs磷酸化水平：
　?。?）與對(duì)照組比較，ERK1/2磷酸化水平在ApoE-/-、ApoE2和所有ApoE-TR/5XFAD組中升高（P<0.05）；
　　（2）JNK磷酸化水

11、平僅在ApoE-/-組中升高（P<0.05），在其他ApoE-TR組和所有ApoE-TR/5XFAD組中無(wú)顯著變化（P>0.05）；
　?。?）在所有組別中P38磷酸化水平未見顯著差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、無(wú)論有否AD基因背景，ApoE基因缺失小鼠均可導(dǎo)致嚴(yán)重的高脂血癥、主動(dòng)脈AS斑塊和ICAM-1、VCAM-1等炎癥分子高表達(dá)；ApoE2基因型可引起明顯高脂血癥，但其促主動(dòng)脈AS和上述炎癥分子高表達(dá)