甘草部黃酮干預ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化的研究.pdf

1、目的:
　　建立C57BL/6J小鼠高脂血癥(Hyperlipidemia，HLD)模型，給予甘草總黃酮(Totallicorice flavonoids，TLF)干預，以銀杏葉片、辛伐他汀作為陽性對照藥，評價TLF的調脂效果;建立ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)模型，給予TLF干預，以銀杏葉片作為陽性對照藥，分別檢測血脂水平、抗氧化活力及CRP、IL-6、PLTP等細胞因

2、子水平等指標，光鏡下觀察肝臟和主動脈組織病理結構改變，評價其對AS的干預作用，旨在探討TLF改善AS病理形態(tài)變化的作用及其抗AS可能的作用機制，為動脈粥樣硬化治療尋找新靶點、為新藥研發(fā)提供實驗數(shù)據(jù)及理論基礎。
　　方法:
　　1.清潔級C57BL/6J小鼠56只，雄性，體重18-22g，隨機分為7組，正常組，模型組，陽性對照組（辛伐他汀、銀杏葉片），TLF(30 mg·kg-1，60 mg·kg-1，120 mg·kg-1)

3、3個劑量組，每組8只，適應性喂養(yǎng)1周。正常組給予小鼠正常顆粒飼料，其余各組給予高脂飼料喂養(yǎng)。正常對照組、模型組每天灌胃給以等容量生理鹽水，其余各組進行給藥干預，連續(xù)6周。
　　實驗前，禁食不禁水12h，實驗時摘眼球取血，分離血清，酶法及黃嘌呤氧化酶法檢測血清脂質水平及抗氧化活力指標。
　　2.11周齡ApoE-/-小鼠40只，.雄性、體重22-23g，隨機分為:模型組、陽性對照組（銀杏葉片）、TLF(30 mg·kg-1，6

4、0 mg·kg-1，120 mg·kg-1)3個劑量組，每組8只，適應性飼養(yǎng)1周。另取正常11周齡C57BL/6J小鼠8只為正常對照組。正常組給予小鼠正常顆粒飼料，其余各組給予高脂飼料喂養(yǎng)。正常對照組、模型組每天灌胃給以等容量生理鹽水，其余各組進行給藥干預，連續(xù)14周。
　　實驗前，禁食不禁水12h，實驗時摘眼球取血，分離血清，試劑盒檢測血清脂質(TC、TG、LDL-C、HDL-C)水平，生化法試劑盒檢測血清抗氧化活力水平(SOD

5、、MDA、ox-LDL)，ELISA法檢測CRP、IL-6及血清PLTP等相關細胞因子水平;分離小鼠主動脈及肝臟，進行肉眼觀察主動脈脂質浸潤及斑塊形成情況，肝臟色澤、質地等改變，制作組織切片，H&E染色，光鏡下觀察主動脈內(nèi)膜、平滑肌層脂質浸潤以及主動脈斑塊的病理形態(tài)學改變及肝細胞脂肪浸潤等病理改變。
　　結果:
　　1.1高脂血癥模型組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均明顯升高，與正常組比較均有顯著性差異(P＜0.

6、01)，顯示高血脂癥狀。
　　TLF高劑量組能顯著降低TC、TG、LDL-C水平，與模型組比較，差異顯著(TC、TG--P＜0.05，LDL-C--P＜0.01)，但其對HDL-C的影響沒有統(tǒng)計學意義。TLF中劑量組只能顯著降低LDL-C水平，與模型組比較，差異顯著(P＜0.01)，對其他血脂指標的影響沒有統(tǒng)計學意義。TLF低劑量組相比模型組脂質指標的改變均無統(tǒng)計學意義。
　　1.2模型組顯示SOD水平降低、MDA水平升高，

7、與正常組比較均有顯著性差異（P＜0.01）。TLF低、中、高三種劑量組均能顯著升高SOD水平，與模型組比較，均有顯著性差異(P＜0.01)。TLF高劑量組能夠顯著降低MDA水平，與模型組比較，差異有顯著性(P＜0.01)。TLF中、低劑量組對于MDA水平改變無統(tǒng)計學意義。
　　2.1 AS模型組小鼠血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C顯著下降，與正常組比較均有顯著性差異(P＜0.01)，顯示造模成功。TLF高、中、低

8、劑量組均可有效下調血清TC、TG水平，與模型組比較，均有有顯著性差異(P＜0.01)。僅TLF高劑量組可有效下調LDL-C水平，與模型組比較，有顯著性差異(P＜0.01); TLF中、低劑量組對LDL-C水平無顯著影響。TLF高、中劑量組相比模型組可有效上調HDL-C水平，均有顯著性差異(P＜0.01); TLF低劑量組對HDL-C水平無顯著影響。
　　2.2 TLF高、中、低劑量組均能夠升高AS小鼠SOD水平，增強抗氧化活力，下

9、調ox-LDL水平，表明可抑制LDL的氧化修飾，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。
　　2.3 AS模型組小鼠血清CRP、IL-6、PLTP水平均明顯高于正常組，均有顯著性差異(P＜0.01)。TLF高、中、低3個劑量組均能降低CRP、IL-6、PLTP水平，與模型組比較，均有顯著性差異(P＜0.01)。
　　2.4正常組鏡下可見肝小葉結構完整、境界清楚，肝細胞索結構完整，肝血竇間隙適度、無充血現(xiàn)象，無炎癥細胞浸潤

10、。模型組肝小葉境界模糊，肝細胞索結構紊亂，細胞質中可見大量大小不等的脂肪滴，門管區(qū)炎癥細胞浸潤，膠原纖維增生。低劑量組肝細胞脂肪化現(xiàn)象較模型組有所改善，雖有脂肪顆粒，但是主要出現(xiàn)在肝小葉周圍交界處，肝血竇有充血現(xiàn)象，門管區(qū)有炎癥細胞浸潤。中劑量組肝細胞質中可見少量的脂肪滴，門管區(qū)有少量炎癥細胞浸潤，陽性組肝小葉周圍的肝細胞質中幾無脂肪顆粒，門管區(qū)幾無炎癥細胞浸潤。高劑量組與陽性對照比較，肝細胞結構相對完整，未見脂肪樣變，少量炎癥細胞浸潤

11、，病理變化改善情況相似。
　　正常組主動脈內(nèi)膜內(nèi)皮細胞緊密連接，內(nèi)膜與中膜均未見泡沫細胞及脂質沉積。模型組主動脈根部可見內(nèi)膜增厚，有斑塊形成，纖維斑塊有完整的纖維帽，泡沫細胞堆積、部分破裂，膠原及彈力纖維沉積。低劑量組主動脈內(nèi)膜出現(xiàn)中度脂質變性、增厚;管周有程度不等的脂質沉積，部分有斑塊形成，內(nèi)皮下可見泡沫細胞沉積，有少量膠原及彈力纖維沉積，呈中度病變。中劑量組內(nèi)膜有輕度脂質變性;內(nèi)皮偶見泡沫細胞，少見脂質沉積，部分泡沫細胞。高劑

12、量組偶見內(nèi)膜輕度增厚，內(nèi)皮下偶見泡沫細胞，管周無明顯脂質沉積病變。陽性組內(nèi)膜輕度增厚，內(nèi)皮下可見少量泡沫細胞，膠原纖維沉積較模型組顯著減輕，高劑量組與陽性對照比較，病理變化改善情況較好。
　　結論:
　　1.TLF能夠降低C57BL/6J小鼠高脂血脂模型血清TC、TG、LDL-C水平，具有較好的調節(jié)血脂作用;可提高模型的SOD水平，抑制MDA生成，增強抗氧化活力。
　　2.TLF3種劑量均可不同程度調節(jié)ApoE-/-小