巴茱合劑對5xFAD轉(zhuǎn)基因小鼠β-淀粉樣蛋白(Aβ)生成相關(guān)機(jī)制的影響研究.pdf

1、目的:巴茱合劑是本人碩士導(dǎo)師治療阿爾茲海默病(AD)的經(jīng)驗方，前期臨床研究證明，巴茱合劑能有效緩解AD患者認(rèn)知功能障礙，但對巴茱合劑的作用機(jī)制尚未深入研究。本文旨在通過AD轉(zhuǎn)基因動物再次驗證巴茱合劑的治療效果，并進(jìn)一步探索巴茱合劑治療AD的相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法:(1)選取新型APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠(5xFAD小鼠)作為實驗對象。將3月齡5xFAD小鼠隨機(jī)分為模型組(5xFAD-Control)、巴茱合劑低劑量組(5xF

2、AD-BZD-L)、中劑量組(5xFAD-BZD-M)、高劑量組(5xFAD-BZD-H)及安理申組(5xFAD-Donep);同窩出生野生型小鼠隨機(jī)分為正常對照組(WT-Control)、巴茱合劑組(WT-BZD)、安理申組(WT-Donep)。每組小鼠12只。給藥劑量為:5xFAD-BZD-L組，5xFAD-BZD-M組，5xFAD-BZD-組和WT-BZD組分別給予巴茱合劑4.225g/(kg·d)、8.450g/(kg·d)、1

3、6.900g/(kg·d)和16.900g/(kg·d);5xFAD-Donep組和WT-Donep組給予安理申0.65mg/(kg·d);5xFAD-Control組和WT-Control組給予雙蒸水。各組小鼠給藥12周，每日灌胃一次。
　　(2)采用行為學(xué)方法，觀察巴茱合劑對5xFAD小鼠學(xué)習(xí)記憶缺陷及焦慮抑郁障礙的治療效果。曠場實驗(OFT)和高架十字迷宮(EPM)用于評價小鼠自主探究行為和焦慮抑郁狀態(tài);T/Y迷宮(T/YM

4、)、水迷宮(MWM)和條件驚恐實驗(CCFT)分別用于評價小鼠空間交替記憶力、方位定向?qū)W習(xí)記憶力和環(huán)境關(guān)聯(lián)記憶力等認(rèn)知能力。
　　(3)采用分子生物學(xué)方法，探索巴茱合劑是否干預(yù)β-淀粉樣蛋白生成的相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物。與Aβ生成相關(guān)的AD機(jī)制是目前最受關(guān)注的研究焦點(diǎn)。神經(jīng)元胞外β-淀粉樣蛋白(Aβ)堆積是AD的經(jīng)典病理表現(xiàn)之一。Aβ的產(chǎn)生與否關(guān)系到Aβ前體蛋白(APP)的兩條水解途徑:一是由β-分泌酶和γ-分泌酶參與的淀粉源水解途徑，

5、二是α-分泌酶和γ-分泌酶參與的非淀粉源水解途徑。除此之外，乙酰膽堿酯酶(AChE)的異常表達(dá)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的增多及超氧化物歧化酶(SOD)活性異常也將對Aβ生成造成影響。因此，APP、α-分泌酶、β-分泌酶、γ-分泌酶以及AChE、MDA、SOD等蛋白的表達(dá)或活性對Aβ的形成至關(guān)重要。
　　結(jié)果:本實驗研究結(jié)果表明，巴茱合劑對5xFAD小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能缺陷和焦慮障礙有改善作用。在高架十字迷宮中，未給藥的6月齡

6、5xFAD小鼠出現(xiàn)焦慮性過低，在Y迷宮、水迷宮和條件驚恐實驗中則表現(xiàn)出明顯的學(xué)習(xí)記憶功能受損。而巴茱合劑中、高劑量能改善該小鼠焦慮性過低，并提高該小鼠在Y迷宮、水迷宮和條件驚恐實驗中的認(rèn)知能力(P＜0.05或者P＜0.01)。進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，巴茱合劑對5xFAD小鼠腦組織中的Aβ斑塊、β-分泌酶、γ-分泌酶、AChE、MDA的表達(dá)水平和SOD的活性都有影響(P＜0.05或者P＜0.01)。巴茱合劑通過降低β-分泌酶中的BACE1、