煙草白星病的病原學(xué)及生防菌篩選.pdf

1、煙草白星病(Phyllosticta nicotianae Ell.et EV)又叫煙草斑點(diǎn)病，與煙草蛙眼病、黑斑病以及氣候斑點(diǎn)病極為相似，不易區(qū)分且易混生。煙草白星病的病原（Phyllostictanicotianae）一直以來(lái)被認(rèn)為是葉點(diǎn)霉，而葉點(diǎn)霉和莖點(diǎn)霉屬于真菌中的半知菌亞門、腔孢綱、球殼孢目的兩個(gè)屬。二者形態(tài)差異很小，分屬界定標(biāo)準(zhǔn)較模糊，種類鑒定較困難。兩屬的傳統(tǒng)分類依據(jù)主要是以寄生部位進(jìn)行劃分，寄生在葉片上的為葉點(diǎn)霉（Phy

2、llosticta）、寄生在葉以外的為莖點(diǎn)霉（Phoma），但實(shí)際鑒定中，常遇到同一種Phyllosticta或Phoma既寄生在葉片上又寄生在莖、果實(shí)等其它部位的情況，因此很難斷定該病菌是屬于Phyllosticta還是Phoma，對(duì)此，前人也鮮有研究報(bào)道。本文采用傳統(tǒng)的真菌形態(tài)學(xué)鑒定法及分子生物學(xué)鑒定法，對(duì)采自6個(gè)煙草主產(chǎn)區(qū)的病樣進(jìn)行了病原菌分離鑒定，以及病原菌的生物學(xué)特性研究和拮抗菌的篩選。旨為查明煙草白星病病原菌的分類地位，為煙

3、草白星病的防治提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下:
　　(1)煙草白星病病原菌的分離與鑒定:采用對(duì)染病葉片單斑進(jìn)行分離、純化，對(duì)分離菌株致病性測(cè)定、形態(tài)學(xué)鑒定及分子生物學(xué)鑒定等研究法，對(duì)采自于遼寧、黑龍江、廣西等6個(gè)煙草主產(chǎn)區(qū)的具有煙草白星病癥狀的病樣進(jìn)行了病原菌分離鑒定。依據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定法從300多個(gè)樣品中共分離出31株疑似菌株。通過(guò)分子生物學(xué)鑒定結(jié)果表明，菌株間的its序列差異較小、相似度較高;NCBI比對(duì)聚類分析表明，5株是莖點(diǎn)霉屬(

4、Phoma.sp)、2組為擬莖點(diǎn)霉屬(Phomasis.sp)，1組為葉點(diǎn)霉(Phyllosticta.sp)，都屬于未定種，進(jìn)而通過(guò)β-tubulin測(cè)定的結(jié)果為5株是莖點(diǎn)霉屬(Phoma)，分離菌致病性測(cè)定結(jié)果表明他們均具有致病性。
　　(2)病原菌的生物學(xué)特性研究:煙草白星病病原菌適宜的培養(yǎng)基是OA和PDA;最適pH值為5.0-7.0;溫度為4-35℃的范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，25℃左右產(chǎn)孢量最多、孢子萌發(fā)率最大，當(dāng)溫度為40℃不再

5、產(chǎn)孢;光照對(duì)病原菌直徑大小影響不大，但光暗交替利于產(chǎn)孢。
　　(3)拮抗菌的篩選及抑菌效果:從煙草根際土壤中分離純化得到20株真菌和14株細(xì)菌，其中有9株真菌和1株細(xì)菌對(duì)煙草白星病病菌具有明顯的抑菌作用。采用五點(diǎn)對(duì)峙法，以9株真菌、1株細(xì)菌和5種農(nóng)藥（甲基托布津、多菌靈、多菌清、百菌清和惡霉靈）對(duì)煙草白星病病原菌進(jìn)行了抑菌活性檢測(cè)，結(jié)果表明:真菌M7、M8、M9以及有效濃度為25 mg/μl的多菌清具有較好的抑菌效果，他們可使病原