膠質瘤干細胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索.pdf

1、目的:
　　1、擬采用3D培養(yǎng)技術模擬體內環(huán)境研究膠質瘤干細胞增殖的異質性及一些生物特性。
　　2、在體外進行人工合成核酸適體文庫合成，使用Cell-SELEX技術進行篩選，以期得到可以特異性識別膠質瘤干細胞的核酸適體。
　　方法：
　　1、利用微孔陣列芯片技術制作出高通量微膠原蛋白陣列，然后使用固定力的按壓方式，使細胞均勻分布于陣列中，形成三維培養(yǎng)模型。三維長期培養(yǎng)條件下，進行高通量膠質瘤干細胞單細胞異質性分析

2、。
　　2、使用化學方法人工合成的隨機寡核苷酸庫，以體外培養(yǎng)的的人膠質母細胞瘤細胞系U251細胞誘導出的膠質瘤干細胞為靶細胞，以人膠質母細胞瘤細胞系U251細胞為反篩細胞，利用Cell-SELEX技術，進行核酸適體篩選。
　　結果：
　　1、膠質瘤細胞可以高通量微膠原蛋白陣列中長期存活，并且增殖，細胞活性沒有影響。
　　2、經(jīng)過7天、30天培養(yǎng)，觀察、鑒定，3D培養(yǎng)條件下可以觀察到膠質瘤干細胞與膠質瘤細胞之間的增

3、殖能力差異及各自細胞傳代過程中異質性。
　　3、經(jīng)過15輪循環(huán)的篩選得到了可以結合膠質瘤干細胞的核酸適體文庫
　　4、這個核酸適體庫可以很好地與人腦膠質瘤干細胞結合，而不與人腦膠質瘤細胞系U251相結合。
　　結論：
　　1、建立了一種高通量單細胞三維培養(yǎng)平臺，用于膠質瘤干細胞細胞異質性的分析。膠質瘤子細胞傳代具有局限性，而膠質瘤干細胞幾乎可以無限增殖。
　　2、篩選得到的核酸適配體庫可以特異性的結合于靶細