中藥青蒿琥酯對人口腔鱗癌細胞株的抑制作用以及對腫瘤抑制基因RECK表達的影響.pdf

1、目的:研究中藥青蒿琥酯(Artesunate,ART)對人口腔鱗癌Tca8113細胞體外增殖活性、細胞凋亡、細胞周期分布的影響,并檢測其對腫瘤抑制基因RECK蛋白表達的調節(jié)作用,探討其可能的作用機制,擬為中藥青蒿琥酯用于臨床腫瘤的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:將口腔鱗癌Tca8113細胞隨機分為對照組、12.5ug／ml、25ug／ml、50ug／ml、100ug／ml、200ug／ml組共6組,分別培養(yǎng)24h、48h、72h

2、后:(1)采用倒置顯微鏡觀察各濃度組Tca8113細胞形態(tài)學變化；(2)采用MTT法觀察各濃度組對Tca8113細胞的生長抑制作用；(3)采用流式細胞儀分析各濃度組對Tca8113細胞凋亡、細胞周期分布的影響；(4)采用免疫細胞化學法檢測各濃度組對Tca8113細胞RECK蛋白表達的影響。
　　 結果:(1)對照組各時間段細胞貼壁生長良好,邊界清楚,呈上皮樣細胞形態(tài),細胞核位于細胞中央；ART作用24h后,12.5ug／ml、2

3、5ug／ml、50ug／ml濃度組細胞形態(tài)無明顯變化,100ug／ml、200ug／ml濃度組,部分細胞變圓,細胞皺縮,折光性強；作用48h、72h后,細胞呈現(xiàn)不規(guī)則形,有大量空泡出現(xiàn),邊緣呈毛刺狀,折光性差,尤以100ug／ml、200ug／ml濃度組最為明顯。(2)ART作用于Tca8113細胞后能有效地抑制其增殖活性,且隨著作用時間的延長,濃度的增加,其抑制作用越明顯,同一時間段各濃度組細胞抑制率與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<

4、0.05),且同一濃度組不同時間段細胞抑制率比較差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05),呈現(xiàn)時間、劑量依賴性,其中尤以100ug／ml、200ug／ml組,48h、72h時間段最為明顯,抑制率分別為25.74％,29.34％,33.25％和45.47％。(3)ART作用于Tca8113細胞后能有效誘導其凋亡,且隨著作用時間的延長,濃度的增加,其凋亡細胞越多,同一時間段各濃度組細胞凋亡率與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且同一濃度

5、組不同時間段細胞凋亡率比較差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05),呈現(xiàn)時間、劑量依賴性,其中尤以100ug／ml、200ug／ml組,48h、72h時間段最為明顯,凋亡率分別為(30.88±0.53)％,(37.86±0.49)％,(63.20±0.32)％和(83.43±0.44)％。(4)各濃度組ART作用于Tca8113細胞24h、48h、72h后細胞周期分布發(fā)生變化,主要表現(xiàn)為G0／G1期細胞比例增加,S期、G2／M細胞比例減少,同

6、一時間段各濃度組細胞G0／G1期比率與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其中100ug／ml、200ug／ml組最為明顯,G0／G1期期比率分別為(66.92±0.53)％、(68.87±0.49)％、(67.98±0.57)％、(70.92±0.44)％、(72.95±0.68)％、(78.05±0.42)％；同一濃度組不同時間段間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(5)免疫組化結果顯示,ART作用24h,隨著濃度的增加,R

7、ECK陽性表達細胞的平均光密度值呈逐漸增高的趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；ART作用48h、72h,RECK蛋白陽性表達細胞的平均光密度值呈逐漸增高,各濃度組細胞平均光密度值與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在不同時間段,12.5ug／ml、25ug／ml組RECK陽性表達細胞的平均光密度值與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而50ug／ml、100ug／ml、200ug／ml組隨著時間的延長,REC

8、K蛋白陽性表達逐漸增高,各組平均光密度值與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在高濃度組呈現(xiàn)出時間、劑量依賴性。
　　 結論:1、ART對人口腔鱗癌Tca8113細胞的增殖具有明顯抑制作用,且呈現(xiàn)時間、劑量依賴性。2、ART可以誘導Tca8113細胞發(fā)生凋亡,且呈現(xiàn)時間、劑量依賴性。3、ART可以使Tca8113細胞被阻滯在G0／G1期,呈現(xiàn)劑量依賴性,但無時間依賴性。4、ART可以上調Tca8113細胞中腫瘤抑制基因