Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制的初步探討.pdf

1、皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)是皮膚科最常見的惡性腫瘤之一,占非黑素源性惡性腫瘤的20％,僅次于基底細(xì)胞癌（ba sa l ce ll carcinoma,BCC),具有侵襲性,可發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。近幾十年來,皮膚鱗癌的發(fā)病率呈進(jìn)行性增加,危害人類的身體健康,因此對(duì)鱗癌發(fā)生、發(fā)展的研究具有重要的臨床意義。
　　Rab23是小GTP酶Rab家族成員,也是Hedgehog信號(hào)

2、通路的負(fù)調(diào)控因子,不僅具有囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)的功能,而且在多種腫瘤中發(fā)揮不同的作用。課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Rab23在皮膚鱗癌組織中高表達(dá),并能夠促進(jìn)鱗癌細(xì)胞的侵襲,但 Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的作用尚不清楚,因此本課題通過設(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn),研究 Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響,并對(duì)機(jī)制做初步探索。
　　主要實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果:
　　1.Rab23對(duì)鱗癌Sa3細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響
　　1)選取口腔鱗癌 Sa3細(xì)胞株,構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)和干

3、涉 Rab23的Sa3細(xì)胞株;Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Rab23表達(dá)。結(jié)果顯示:過表達(dá)Rab23組融合蛋白轉(zhuǎn)染成功,干涉Rab23組,其表達(dá)較空載體組下降;
　　2)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) Rab23對(duì) Sa3細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示:過表達(dá)Rab23組較對(duì)照組相比,細(xì)胞增殖能力降低,干涉Rab23組較空載體組相比細(xì)胞增殖能力明顯提高;
　　3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)Rab23對(duì)Sa3細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示:過表達(dá)Rab23

4、可引起Sa3細(xì)胞G1期阻滯,影響細(xì)胞周期進(jìn)程;
　　4) CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Rab23對(duì)Sa3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,過表達(dá)Rab23組細(xì)胞生長(zhǎng)能力降低,干涉Rab23組生長(zhǎng)能力增高。
　　2.Rab23抑制鱗癌Sa3細(xì)胞生長(zhǎng)增殖機(jī)制的初步探討
　　1) Western blot檢測(cè)Rab23對(duì)Hedgehog信號(hào)通路分子Gli1、Gli2表達(dá)的影響。結(jié)果顯示:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染過表達(dá)Rab23組和干涉Rab23組

5、其Hed ge ho g信號(hào)通路重要的轉(zhuǎn)錄因子G li1、G li2表達(dá)水平與對(duì)照組和空載體組相比未見明顯變化;
　　2) Western blot檢測(cè)Rab23對(duì)細(xì)胞Erk1/2、p-Erk1/2表達(dá)的影響。結(jié)果顯示:過表達(dá)Rab23組和干涉 Rab23組較對(duì)照組和空載體組相比Erk1/2表達(dá)水平無明顯變化;與對(duì)照組相比,過表達(dá)Rab23組p-Erk表達(dá)水平降低,而干涉Rab23組較空載體組相比p-Erk表達(dá)水平升高。
　

6、　3) Western blot檢測(cè)Rab23對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示:Cyclin E在各組細(xì)胞中的表達(dá)水平未見明顯變化;與對(duì)照組相比,過表達(dá)Rab23組Cyclin D1表達(dá)水平降低,而干涉Rab23組較空載體組相比Cyclin D1表達(dá)水平升高。
　　主要結(jié)論:
　　1) Rab23對(duì)鱗癌Sa3細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖具有抑制作用;
　　2) Rab23可能不通過Hedgehog信號(hào)通路來抑制鱗癌Sa3細(xì)胞的