NF-κB、ELAM-1在小梁網(wǎng)細(xì)胞氧化損傷中的表達(dá)及干預(yù)研究.pdf

1、NFKB、ELAM1在小粱網(wǎng)細(xì)胞氧化損傷中的表達(dá)及干預(yù)研究摘要目的：本實(shí)驗(yàn)利用Q硫辛酸(0【LA)干預(yù)氧化應(yīng)激下的大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞，觀察小梁網(wǎng)細(xì)胞的形態(tài)變化，檢測核轉(zhuǎn)錄因子rB(NF1出)、內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞黏附分子1(EL舢Ⅵ1)的表達(dá)，探討氧化應(yīng)激、NFrB、ELAM1在原發(fā)性開角型青光眼(POAG)發(fā)病機(jī)制中的作用，以及aLA對小梁網(wǎng)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。方法：原代培養(yǎng)大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞，免疫組化法鑒定。取傳至第三代的細(xì)胞按2x105／ml消化傳

2、入6孔板，血清饑餓過夜。隨機(jī)分為五組：A組為正常對照組，加入不含藥物的無血清培養(yǎng)基；B組為單純H202損傷組，加入等量含800ⅢvlH202的無血清培養(yǎng)基；C組為aLA干預(yù)組，按照給予QLA濃度的不同分為Cl、C2、C3三個(gè)亞組，加入等量含800MH20z以及濃度依次為1009M、5000M、10001tM的aLA的無血清培養(yǎng)基。將各組細(xì)胞均置于5％C02培養(yǎng)箱中37。C培養(yǎng)2h。光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，免疫組化法和Realtim

3、ePCR法檢測并比較各組NFrB、ELAM1表達(dá)的變化。結(jié)果：1利用消化法成功培養(yǎng)出大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞，原代細(xì)胞呈三角形、梭形或不規(guī)則形，1014天融合成旋渦狀單層細(xì)胞，傳至第三代后細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定，梭形，胞漿豐富，顆粒多，可見較多突起及分支。取傳至第三代的細(xì)胞行AntiLN、AntiFN、AntiNSE免疫組化染色鑒定，見細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色陽性顆粒，陰性對照不著色，符合小梁網(wǎng)細(xì)胞的特性。2與A組相比，B組小梁網(wǎng)細(xì)胞突起減少，細(xì)胞回縮，間隙擴(kuò)大，細(xì)

4、胞數(shù)量減少；而C組隨著3tLA濃度的增加，細(xì)胞形態(tài)改變與A組相比逐漸趨于不明顯。3五組小梁網(wǎng)細(xì)胞NF佃表達(dá)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=426515，P=0000)。A組小梁網(wǎng)細(xì)胞質(zhì)中少量表達(dá)NF1出；B組NF1cB大量活化進(jìn)入細(xì)胞核，表達(dá)量較A組明顯升高(礦0000)：C組中NF1出在胞質(zhì)、胞核中均有表達(dá)，且與B組相比，NF心mRNA表達(dá)量降低(p分別為0036、0000、0000)；C2、C3兩組與Cl組相比明顯降低(網(wǎng)000)；C2、C3

5、兩組間比較無明顯差異(礦O204)；C2組與A組相比仍偏高(p=0016)，但C3組與A組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(卿155)。4五組小梁網(wǎng)細(xì)胞ELAM1均表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，且表達(dá)量有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=96409，P=0000)。A組少量表達(dá)ELAM1mRNA；B組較A組表達(dá)明顯升高(礦0000)；C組較B組表達(dá)均明顯降低p分別為0016、0000、0000)；隨著0【LA濃度的增加，ExpressionsandinterventionofN

6、FKBandELAM—IinoxidativestressinducedbyH202intrabecularmeshworkcellsAbstractobjective：Toevaluatetheeffectsofnucleartranscriptionfactors—kappaB(NF心)andendothelialleukocyteadhesionmoleculeI(ELAM1)inoxidativestressinducedbyh

7、ydrogenperoxideCa202)inrattrabecularmeshwork(TM)cellsAtthesametime，weusedalphalipoicacid(alphaLA)astheinterventiontherapytoinvestigatetheprotectionmechanismfortheinjuredTMcellsMethod：1PrimarycultureandidentificationofTMc

8、ells：TMcellswereculturedusingenzymedigestionmethodwitheyetissuesof5一weekoldWistarratsSABCimmunocytochemicalmethodwasusedtoidentifyfibronectin(FN)，lamjnin正N)andneuronspecificenolase(NSE)2Cellgrouping：Afteronenightofserums

9、tarvation，mcellsweredividedintofivegroups：normalcontrolgroup(A)；H202group(B)：thecellswereculturedwith800rtMH202；H202andQLAgroup(C)：C1：thecellswereculturedwith800tLMH202and1009MⅡLA；C2：thecellswereculturedwith800UMI1202and

10、5001xM旺LA；Cs：thecellswereculturedwith800rtMH202and1000rtMa—LAAnthecellsWasculturedat37℃under5％C02for2hours3DetectionofNF—rBandELAM1：WeobservedthemorphologicalchangesoftheTMcellsineachgroupunderopticalmicroscope，anddetect

11、edandcomparedtheexpressionofNF—rBandELAM1among5groupsbyimmunocytochemistryandRealtimePCRResults：1WesuccessfullyculturedratTMcellsImmunocytochemicalanalysisrevealedthatthesecellswerepositiveforFN，LNandNSEexpression2Compar

12、edwithgroupA，thecellsofgroupBretracted，gapwidenedanddensitydecreased；AndwiththeincreaseofconcentrationofaLA，themorphologychangeofgroupCtendedtobenotobviousgraduallycomparedwimgroupA3NF—rBandELAM1levelsrevealedahighsignif