NF-κB在Il-1β上調(diào)肺成纖維細(xì)胞表達(dá)ICAM-1mRNA中的作用.pdf

1、目的:本研究通過(guò)體外培養(yǎng)Wistar大鼠肺成纖維細(xì)胞，采用RT-PCR方法測(cè)定肺成纖維細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子ICAM-1mRNA及Western blot方法測(cè)定NF-κB p65表達(dá)水平的變化，探討促炎因子IL-1β對(duì)肺成纖維細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　 方法:采用組織切塊法培養(yǎng)大鼠胚肺成纖維細(xì)胞:取第5～6代形態(tài)、結(jié)構(gòu)一致貼壁

2、生長(zhǎng)的肺成纖維細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)分為三組:①對(duì)照組:將肺成纖維細(xì)胞應(yīng)用單純的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)6h;②白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）組:將肺成纖維細(xì)胞中置入含IL-1β(15ng/ml)的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)6h;③吡咯烷二硫氨基甲酸鹽（pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）組:首先將肺成纖維細(xì)胞應(yīng)用PDTC100nmol/ml預(yù)處理20分鐘，然后再置入含IL-1β(15ng/ml

3、)的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)6h。
　　 RT-PCR法測(cè)定肺成纖維細(xì)胞中ICAM-1 mRNA表達(dá)水平，WesternBlot蛋白免疫印跡法測(cè)定肺成纖維細(xì)胞中NF-κB p65蛋白的活化，以上各組實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次。
　　 結(jié)果:
　　 1.RT-PCR法檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞ICAM-1 mRNA的濃度/水平變化各實(shí)驗(yàn)組均在234bp處出現(xiàn)了特異性的ICAM-1 mRNA條帶，576bp處出現(xiàn)了內(nèi)參Ratβ-actin的特異片

4、段。ICAM-1mRNA電泳條帶的光密度掃描顯示，對(duì)照組有一定量的ICAM-1mRNA基礎(chǔ)表達(dá)，水平甚低（0.265±0.079）。與對(duì)照組相比，IL-1β組和PDTC組ICAM-1mRNA的表達(dá)量均明顯升高（0.870±0.108、0.504±0.075，P＜0.01），PDTC組的升高水平明顯低于與IL-1β組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞NF-κB p65

5、的變化Western blot分析顯示，NF-κB p65蛋白表達(dá)在65KD的位置上出現(xiàn)一條雜交帶。與對(duì)照組相比，IL-1β組、PDTC組NF-κB p65蛋白的相對(duì)含量均增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.460±0.061、1.22±0.179、0.711±0.112，P均＜0.01）;并且PDTC組NF-κB p65蛋白的相對(duì)含量低于IL-1β組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.IL-1β誘

6、導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞ICAM-1 mRNA的表達(dá)增高，2吡咯烷二硫氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)可抑制IL-1β對(duì)肺成纖維細(xì)胞表達(dá)ICAM-1 mRNA。
　　 3.IL-1β可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)的活化。
　　 4.PDTC通過(guò)阻斷細(xì)胞內(nèi)NF-κB通路的活化，而抑制IL-1β上調(diào)肺成纖維細(xì)胞表達(dá)ICAM-1 mRNA