NF-κB在內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用及干預(yù)研究.pdf

1、目的：隨著生活水平的提高，心血管疾病的發(fā)病率和致死率逐年增加，業(yè)已成為危害人類健康的頭號(hào)殺手。作為整個(gè)心血管系統(tǒng)的內(nèi)襯，內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)維持正常心血管系統(tǒng)功能有著重要的作用，其損傷及功能變化與心力衰竭、冠心病等心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。NF-κB廣泛存在于真核生物中，作為信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的樞紐，是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，它易被炎性因子激活，從而啟動(dòng)其它靶基因的表達(dá)引起多種生物學(xué)相象。AngⅡ作為RAS的主要活性肽，引起體內(nèi)一系列的病理反應(yīng)，

2、包括加重炎性反應(yīng)、誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生等，并可以直接導(dǎo)致心肌重構(gòu)并引起終末器官的直接損害，同時(shí)AngⅡ也被認(rèn)為是多種炎性反應(yīng)的介質(zhì)，TNF-α是體內(nèi)一個(gè)重要的炎性因子，在心力衰竭等心血管疾病過程中心肌將是TNF-α產(chǎn)生者，體內(nèi)過量的TNF-a介導(dǎo)著細(xì)胞多種生物學(xué)活性，例如誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生等，其介導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)對(duì)心血管系統(tǒng)有著重要的作用。因此，研究AngⅡ和TNF-α對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響以及NF-κB在其中的作用及機(jī)理，對(duì)心血管疾病的防治具有

3、重要的理論基礎(chǔ)和實(shí)際意義。 方法(1)用AngⅡ干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞，Tunel檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡情況，EMSA檢測(cè)NF-κB的活性；并用NF-κB、AT1和AT2抑制劑來預(yù)處理細(xì)胞，NF-κB活性的檢測(cè)了解AT1和AT2在AngⅡ誘導(dǎo)NF-κB激活中的作用，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡了解NF-κB、AT1和AT2在AngⅡ誘導(dǎo)NF-KB激活中的作用。 (2)采用RT-PCR、Western-blot方法檢測(cè)AngⅡ干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞iNOSmR

4、NA和蛋白表達(dá)變化，并用NF-κB、AT1和AT2抑制劑來進(jìn)行干預(yù)，初步探討AngⅡ激活NF-κB后導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的下游通路。 (3)用TNF-a干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞，Tunel和DNALadder檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況，并用NF-κB的抑制劑來進(jìn)行干預(yù)以了解NF-κB在其中的作用；并進(jìn)一步探討MAPK在TNF-a激活NF-κB中的作用。 結(jié)果：(1)AngⅡ呈時(shí)間和劑量依賴性引起血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生；AngⅡ是通過與AT1的拮

5、抗劑能抑制AngⅡ引起的NF-κB核移位和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，而AT2的拮抗劑無此作用；NF-κB的拮抗劑可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生。(2)RT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)AngⅡ時(shí)間和劑量依賴引起內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)iNOSmRNA和蛋白表達(dá)的上調(diào)，并以時(shí)間依賴引起細(xì)胞內(nèi)NO含量的上升。AT1和NF-κB的拮抗劑可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的iNOS表達(dá)的增加，而AT2的拮抗劑無此作用。 (3)TNF-α?xí)r間依賴性引起NF-

6、κB的激活和胞漿內(nèi)IKBα的降解；TNF-α?xí)r間依賴性對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡產(chǎn)生影響，以及NF-κB的激活在其中有著重要的作用；p38MAPK可能參與了TNF-α對(duì)IκBα的降解，從而進(jìn)一步誘導(dǎo)NF-κB的活化，而ERK和JNK則可能沒有參與這一過程。 結(jié)論：(1)在內(nèi)皮細(xì)胞中AngⅡ與AT1相結(jié)合，降解了胞漿內(nèi)的IκBα引起NF-κB的激活，而NF-κB的激活啟動(dòng)了iNOS的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)大量的NO生成，這些大量的NO可以與AngⅡ

7、誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的氧自由基相結(jié)合生成ONOO-，從而引起了細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 (2)NF-κB的激活同樣是TNF-α誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵，TNF-α通過降解IκBα來激活NF-κB，MAPK家族中的p38MAPK可能參與了TNF-α對(duì)NF-κB的活化，而ERK和JNK則可能沒有參與這一過程。 核因子-κB是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，與免疫、細(xì)胞凋亡等重要生物學(xué)事件有著密切聯(lián)系。近來大量研究表明其在心力衰竭發(fā)病機(jī)制中有著重要的作用