NF-κB信號通路在RSV感染中的作用及黃芩苷的干預(yù).pdf

1、目的:
　　 1.通過觀察人肺泡皮細胞(A549)呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytial Virus,RSV)感染后核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κ B)信號通路中NF-κ Bp65、p50亞基及Iκ B激酶β(Iκ B kinaseβ,IKKβ)蛋白的表達情況,探討NF-κ B信號通路在RSV感染中的作用；
　　 2.觀察中藥單體黃芩苷(baicalin)對RSV感

2、染A549細胞NF-κ Bp65、p50及IKKβ表達的影響,探討黃芩苷的抗炎機制,為抗RSV感染治療藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)和新的途徑。
　　 方法:
　　 1.實驗分組:將A549細胞分成4組:(1)病毒組(C組):接種RSV半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCIDSO)(TCID50=10-7.7/50ul),35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h,棄接種的病毒液,換成細胞維持液。(2)治療組:設(shè)黃芩苷治療組(D組),接種RSV病毒IO

3、OTCID50,35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h,棄接種的病毒液,黃芩苷治療組換成用細胞維持液稀釋的黃芩苷(終濃度為0.156mg/ml)。(3)對照組:設(shè)細胞對照組(A組)和藥物對照組(B組),細胞對照組接種對照液,35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h,換成細胞維持液；藥物對照組接種對照液,35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h,換成用細胞維持液稀釋的黃芩苷(終濃度為0.156mg/ml)。各組依據(jù)實驗要求,繼續(xù)在上述條件下培養(yǎng),于RSV感染后/藥物

4、治療后的不同時間點(6h、12h、24h、48h)收集細胞。2.免疫細胞化學(xué)(Immunocytochemistry,ICC)法檢測細胞內(nèi)NF-κ Bp65、p50、IKKβ蛋白水平:結(jié)果以標記指數(shù)(Labeling index,LI)表示。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組細胞內(nèi)NF-κ Bp65蛋白表達:C組p65蛋白6h(6.533±0.503)、12h(6.733±0.230)、24h(6.464±0.503)、48

5、h(9.433±0.513)明顯高于A組6h(3.100±1.014)、12h(3.000±1.000)、24h(2.933±1.006)、48h(2.933±1.106)(P<0.05)；D組p65蛋白24h(4.466±0.808)、48h(6.933±0.404)也高于同期A組,與同期A組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；B、D組p65蛋白6h[(2.800±1.058)、(3.133±0.808)]、12h[(3.466

6、±0.503)、(4.100+0.173)]與同期A組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；B組p65蛋白24h(3.800±0.721)、48h(3.800+0.921)與同期A組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2.各組細胞內(nèi)NF-κ Bp50蛋白表達:C組p50蛋白6h(6.400±0.346)、12h(6.867±0.306)、24h(6.467±0.306)、48h(9.533±0.306)明顯高于A組6h(3.2000±0.20000)

7、、12h(3.1333±0.11547)、24h(2.9333±0.30551)、48h(2.9333±0.23094)(P<0.05)；D組p50蛋白12h(3.9333±0.23094)、24h(4.0667±0.41633)、48h(6.7333±0.30551)高于同期A組(均P<0.05)；B組48hp50蛋白(3.467±0.11547)高于同期A組(P<0.05)；B、D組6hp50蛋白(3.0667±0.30551,3.

8、3333±0.23094)與同期A組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.各組細胞內(nèi)IKKβ蛋白表達:C組IKKβ蛋白12h(4.3333±0.80829)、24h(6.0000±1.20000)、48h(4.1333±0.11547)明顯高于A組12h(2.4000±0.40000)、24h(2.9000±0.30551)、48h(2.6667±0.50332)(P<0.05)；D組IKKβ蛋白12h(3.7333

9、±0.30551)、48h(3.7333±0.11547)也高于同期A組(均P<0.05)；而B、D組6h IKKβ蛋白(2.5333±0.30551,2.8667±0.23094),D組24h(3.467±0.462)、B組48h(2.5333±0.11547)與同期A組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.RSV感染A549細胞NF-κ B信號通路激活,NF-κ Bp65、p50、IKKβ