人VEGF165對(duì)肝硬化大鼠半肝切除術(shù)后余肝再生能力的影響.pdf

1、目的：觀察外源性人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165（hVEGF165）對(duì)肝硬化大鼠肝部分切除術(shù)后余肝再生及肝功能恢復(fù)的影響。
　　方法：采用基因重組技術(shù)構(gòu)建 hVEGF165慢病毒表達(dá)載體，通過(guò)Real time PCR法測(cè)定病毒滴度；攜帶hVEGF165基因的慢病毒載體體外轉(zhuǎn)染BLR3A大鼠肝細(xì)胞72h后，利用RT-PCR與Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中hVEGF165 mRNA及蛋白的表達(dá)；傳統(tǒng)CCl4誘導(dǎo)法構(gòu)建大鼠肝硬化模型，肝

2、穿刺病理學(xué)檢查法鑒定模型；126只肝硬化大鼠行50％肝切除術(shù)后隨機(jī)分為3組，A組（VEGF165組）：門(mén)靜脈注射hVEGF165慢病表達(dá)毒載體；B組（空病毒組）：門(mén)靜脈注射空慢病毒載體；C組（對(duì)照組）：門(mén)靜脈注射PBS緩沖液。分別于術(shù)前、術(shù)后12h、24h、72h、7d、14d及28d檢測(cè)各組大鼠余肝組織hVEGF165 mRNA與蛋白的表達(dá)、肝再生率、PCNA陽(yáng)性表達(dá)率及門(mén)靜脈血液中ALT與AST含量。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了表達(dá)

3、hVEGF165的慢病毒載體pLenti6/V5-D-TOPO- hVEGF165，測(cè)得病毒滴度為：1.18×107v.p./mL。重組慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染BLR3A大鼠肝細(xì)胞72h后，熒光蛋白表達(dá)率超過(guò)80%，RT-PCR與Western blot法測(cè)得轉(zhuǎn)染組hVEGF165 mRNA及VEGF165蛋白表達(dá)陽(yáng)性，而陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組表達(dá)陰性；肝硬化大鼠模型制模成型率為96.18%；VEGF165組術(shù)后72h至術(shù)后28d肝再生率分別

4、為34.98±6.22%、62.19±1.81%、83.54±4.50%、92.23±4.41%，術(shù)后24h至術(shù)后28d PCNA陽(yáng)性表達(dá)率分別為18.05±0.92%、42.89±5.52%、35.56±3.86%、26.37±1.35%、19.48±2.70%均顯著高于對(duì)照組（P<0.01）；術(shù)后72h至術(shù)后28d血清ALT含量分別為258.14±12.94 U/L、215.67±22.12 U/L、175.92±8.78 U/L、