磁標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠肝切除術(shù)后肝再生作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:肝切除術(shù)是肝膽外科中肝臟疾病的主要治療手段之一。然而肝切除術(shù)后可發(fā)生如膽道損傷、切口感染、膽漏、術(shù)后腹腔出血、肝功能衰竭等并發(fā)癥，其中肝功能衰竭是肝切除術(shù)后主要并發(fā)癥，也是圍手術(shù)期死亡的主要原因。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)具有多向分化潛能，在一定的微環(huán)境下可以向肝細(xì)胞分化，同時(shí)可以分泌多種細(xì)胞因子，促進(jìn)損傷肝組織修復(fù)，已用于多種肝臟疾病的治療。然而，BMSCs用于肝

2、切除術(shù)的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MRI示蹤磁標(biāo)記的BMSCs在肝切除術(shù)模型內(nèi)的存活、分布及遷徙情況，來(lái)觀(guān)測(cè)BMSCs對(duì)肝切除術(shù)的作用。
　　 方法:采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)BMSCs，流式細(xì)胞儀測(cè)定其表面分子。對(duì)不同SPIO濃度標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色，來(lái)測(cè)定標(biāo)記后的細(xì)胞活性。采用MTT法檢測(cè)不同濃度SPIO對(duì)BMSCs增殖的影響。對(duì)不同SPIO濃度標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行普魯士藍(lán)染色，來(lái)測(cè)定標(biāo)記率。建立SD大鼠70％肝切除模型。

3、將SD大鼠分為四組:A組為肝切除對(duì)照組;B組為肝局部移植組;C組為脾內(nèi)移植組;D組為正常對(duì)照組，觀(guān)測(cè)術(shù)后SD大鼠一般情況及谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的變化，并行MRI成像，分析結(jié)果。
　　 結(jié)果:取第3代BMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其相應(yīng)抗體，結(jié)果顯示:CD29細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率為97.36％，CD90細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率為99.61％，CD45細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率為2.2％。臺(tái)盼藍(lán)染色顯示:第1、3、5、7d時(shí)，0μg/ml、25μg/ml、50μ

4、g/ml、75μg/ml和100μg/ml濃度組細(xì)胞活力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，但隨著標(biāo)記濃度的升高，細(xì)胞活力有逐漸減低的趨勢(shì)。行MTT檢測(cè)后，得出SD大鼠BMSCs倍增時(shí)間為(36.78±2.48)h，25μg/mlSPIO磁標(biāo)記后倍增時(shí)間為(33.16±1.64)h，50μg/mlSPIO磁標(biāo)記后倍增時(shí)間為(34.78±1.67)h，75μg/mlSPIO磁標(biāo)記后倍增時(shí)間為(37.44±3.50)h，100μg/mlSPI

5、O磁標(biāo)記后倍增時(shí)間為(36.87±3.56)h。5組數(shù)據(jù)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。普魯士藍(lán)染色顯示:25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml和100μg/ml濃度組間標(biāo)記率差異相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，而標(biāo)記濃度為12.5μg/ml與以上四組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。術(shù)后肝功檢測(cè)示:術(shù)后1d各組大鼠ALT、AST水平均達(dá)到最高峰，之后逐漸下降，且在1d～3d內(nèi)下降速度最快，術(shù)后7d可趨于正常水平。B組、C

6、組術(shù)后1d、3d和7d時(shí)ALT、AST水平均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，同時(shí)B組、C組ALT、AST水平先于A組趨于正常。在術(shù)后1d、3d、7d時(shí)B組和C組間ALT、AST水平無(wú)顯著意義(P＞0.05)。術(shù)后MRI成像示:肝切除術(shù)后3d，B組與C組SD大鼠在MRI的GRET2*WI序列上肝臟內(nèi)出現(xiàn)彌漫性顆粒狀特異性低信號(hào)改變。術(shù)后7d觀(guān)察到肝臟內(nèi)低信號(hào)區(qū)域范圍變大，信號(hào)強(qiáng)度(SI)減低。但隨著移植時(shí)間延長(zhǎng)，信號(hào)減低

7、程度逐漸減輕。對(duì)不同組、不同時(shí)相肝臟區(qū)在MRI下的GRET2*WI序列所獲得的SI值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明，各組術(shù)后3d、7d與14d肝臟區(qū)SI值無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但B組與C組SI值有隨時(shí)間減低的趨勢(shì);A組SI值與B組或C組SI值比較均有顯著性差異(P＜0.05)，B組SI值與C組SI值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:全骨髓培養(yǎng)法仍是目前提取SD大鼠BMSCs的簡(jiǎn)單、有效的方法;SPIO標(biāo)記BMSCs的適宜濃度為2