非小細(xì)胞肺癌血行微轉(zhuǎn)移以及基因多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分：CD44V6和CK19基因表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌血行微轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究
　　 目的:檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)癌組織和外周血中CD44V6和CK19基因的表達(dá)，探討CD44V6和CK19基因表達(dá)與NSCLC外周血微轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其臨床意義。
　　 方法:隨機(jī)選擇56例NSCLC患者，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)NSCLC組織中CK19、CD44V6基因表達(dá)，同時(shí)采用

2、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)NSCLC外周血中CK19mRNA、CD44V6mRNA表達(dá)情況;采集20例肺部良性病變患者正常肺組織和外周血作對(duì)照。
　　 結(jié)果:
　　 1.CD44V6基因在NSCLC組織中表達(dá)顯著高于良性病變正常肺組織(P＜0.001)，CD44V6高表達(dá)與TNM分期(P=0.005)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.024)有關(guān)。CK19在NSCLC組織和良性病變肺組織均為高表達(dá)，與臨床病理特征未見(jiàn)

3、相關(guān)性，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.NSCLC患者外周血中CD44V6mRNA及CK19mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率分別為64.29％(36/56)、57.14％(32/56)，均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。CD44V6mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC中陽(yáng)性表達(dá)率分別為35.71％、66.67％、86.67％，其陽(yáng)性表達(dá)率與臨床分期(P=0.016)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.02)有關(guān);CK19mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC中陽(yáng)性表達(dá)率

4、分別為28.57％、59.30％、80.0％，其陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期有關(guān)(P=0.019)。
　　 3.CD44V6和CK19在NSCLC組織中表達(dá)與外周血中表達(dá)均呈正相關(guān)(P＜0.05)，NSCLC外周血中CD44V6mRNA與CK19mRNA表達(dá)成正相關(guān)(P=0.002);CD44V6mRNA與CK19mRNA聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為75.0％，優(yōu)于單基因檢測(cè)。
　　 結(jié)論:CD44V6和CK19基因在NSCLC癌組織和外周血

5、中表達(dá)較高，CD44V6高表達(dá)與NSLCL的侵襲轉(zhuǎn)移特性相關(guān)，CD44V6mRNA和CK19mRNA聯(lián)合檢測(cè)有助于提高陽(yáng)性率，可作為檢測(cè)NSCLC患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分子標(biāo)志物。
　　 第二部分：手術(shù)操作對(duì)非小細(xì)胞肺癌術(shù)中血行微轉(zhuǎn)移的影響
　　 目的:探討NSCLC肺靜脈血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell，CTC)定量檢測(cè)方法，以及手術(shù)操作對(duì)非小細(xì)胞肺癌血行微轉(zhuǎn)移的影響。
　　 對(duì)

6、象和方法:隨機(jī)選擇30例可手術(shù)NSCLC患者，隨機(jī)分為先結(jié)扎肺靜脈組和先結(jié)扎肺動(dòng)脈組，以CD44V6和CK19基因作為檢測(cè)標(biāo)志物，采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-RTPCR)技術(shù)檢測(cè)手術(shù)前、后期肺靜脈血中CK19mRNA和CD44V6mRNA表達(dá)情況，同時(shí)采集15例健康志愿者外周血作對(duì)照。
　　 結(jié)果:
　　 1.NSCLC患者肺靜脈血中CD44V6mRNA和CK19mRNA分別為7.93±1.70、10.76±2

7、.74，顯著高于對(duì)照組外周血，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.肺動(dòng)脈先結(jié)扎組CD44V6mRNA和CK19mRNA在手術(shù)前、后期分別為7.92±1.97vs5.67±2.11和11.21±3.14vs8.60±4.02，肺靜脈先結(jié)扎組CD44V6mRNA和CK19mRNA在手術(shù)前、后期分別為7.95±1.91vs7.74±2.10和10.60±3.15vs10.30±2.98。肺靜脈先結(jié)扎組在手術(shù)前后CD44V6和

8、CK19，兩者表達(dá)均無(wú)差異性(P＞0.05)，肺動(dòng)脈先結(jié)扎組CD44V6mRNA、CK19mRNA表達(dá)在手術(shù)后期均顯著高于手術(shù)前期(P≤0.05)。
　　 結(jié)論:非小細(xì)胞肺癌患者肺靜脈血中可檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞，手術(shù)操作可能促進(jìn)了血行微轉(zhuǎn)移，先結(jié)扎肺靜脈后結(jié)扎肺動(dòng)脈一定程度可減少血行微轉(zhuǎn)移。
　　 第三部分：非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞抗原-4基因多態(tài)性以及與血行微轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究
　　 目的:探討NSCLC患者細(xì)胞

9、毒T淋巴細(xì)胞抗原-4(Cytotoxic T-lymphocyte antigen-4，CTLA-4)基因多態(tài)性的特點(diǎn)以及與血行微轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　 方法:采用PCR-RFLP方法檢測(cè)158例NSCLC患者（包括第二部分30例NSCLC患者）和72例健康對(duì)照者CTLA-4+49A＞G基因分型。
　　 結(jié)果:
　　 1.CTLA-4+49A＞G基因多態(tài)的分布
　　 CTLA-4+49A＞G基因多態(tài)的3種基因

10、型在肺癌NSCLC患者中分布分別為:GG型44.30％(70/158)，GA型41.77％(66/158)和從型13.92％(22/158)，對(duì)照組分布為:GG型48.6％(34/72)，GA型41.7％(31/72)和AA型9.7％(7/72)。NSCLC患者中攜帶CTLA-4+49AA基因型者頻率高于對(duì)照組(P=0.046)，與GG基因型相比，攜帶從型基因型者的相對(duì)危險(xiǎn)度為1.489(95％CI，0.977-2.060)。
　

11、　 2.CTLA-4+49A＞G基因多態(tài)與NSCLC臨床病理特征以及血行微轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　 CTLA-4+49A＞G多態(tài)與NSCLC患者性別、病理類型、臨床分期、腫瘤標(biāo)記物（CEA、CYFRA21-1）、CK19mRNA以及CD44V6mRNA表達(dá)均無(wú)顯著相關(guān)(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:CTLA-4+49A＞G基因多態(tài)與NSCLC臨床病理特征及血行微轉(zhuǎn)移未見(jiàn)明顯相關(guān)，CTLA-4+49AA基因型可能是NSCLC的遺