丹參注射液對鉛致腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:鉛具有腎毒性，可導(dǎo)致腎臟功能障礙。鉛誘導(dǎo)腎損傷的機(jī)制之一是增加產(chǎn)生活性氧物質(zhì)和誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。目前治療鉛中毒的方法是使用螯合劑，然而，由于螯合劑數(shù)量的缺乏和固有的毒性，難以足量和長期的應(yīng)用，所以臨床上需要新的鉛中毒治療藥物。丹參具有清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的功能，由此我們推測，它可能對鉛誘導(dǎo)所致腎損傷具有保護(hù)作用。本研究的目的是探討丹參注射液對鉛中毒小鼠腎臟損傷的保護(hù)作用并研究其潛在的機(jī)制。
　　 方法:
　　

2、 1、材料。
　　 健康的雄性昆明小鼠80只，體重20.0±3.0g，于實(shí)驗(yàn)中心動物房分籠飼養(yǎng)，統(tǒng)一飼料，任意進(jìn)食和飲水。
　　 2、動物分組與給藥。
　　 經(jīng)過1周的環(huán)境適應(yīng)，將所有的小鼠隨機(jī)分為四組:正常對照組（control）、鉛模型組(Lead)、丹參低劑量組(L-SM)和丹參高劑量組(H-SM)，每組20只。鉛模型組、丹參低劑量組和丹參高劑量組的小鼠腹腔注射40 mg/kg/day醋酸鉛以建立鉛染毒模

3、型，丹參治療組的小鼠分別以3 g/kg/day和6 g/kg/day的劑量腹腔注射丹參注射液，正常對照組的小鼠腹腔注入等容積生理鹽水，所有小鼠維持正常的進(jìn)食和飲水。每天觀察小鼠的攝食和活動，在實(shí)驗(yàn)開始測量并記錄各組小鼠的體重。試驗(yàn)共進(jìn)行10天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)小鼠全部存活，記錄每只動物最終的體重，麻醉后采血，取出腎臟稱重并用于其他指標(biāo)的檢測。
　　 3、檢測指標(biāo)。
　　 3.1、高效液相色譜聯(lián)合紫外分析。
　　 采用高

4、效液相色譜聯(lián)合紫外分析法對丹參注射液進(jìn)行成分分析測定。
　　 3.2、測定腎臟系數(shù)。
　　 用電子分析天平稱重小鼠腎臟重量并計(jì)算腎臟系數(shù)。
　　 3.3、測量血鉛濃度和腎臟鉛濃度。
　　 用火焰原子吸收光譜法處理標(biāo)本并分析血液和腎臟勻漿中的鉛濃度。
　　 3.4、腎臟的組織學(xué)檢查。
　　 取出和固定腎臟組織標(biāo)本并嵌入石蠟制成切片。用蘇木素和伊紅(H&E)染色后行組織學(xué)檢查。
　　

5、3.5、測定血清的生化指標(biāo)。
　　 采用試劑盒測定每只小鼠血清中的尿素氮(BUN)和肌酐(CR)水平。
　　 3.6、測定小鼠腎勻漿的谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)。
　　 將腎臟組織樣本稱重并研磨分離腎臟勻漿，取上層清液用于生化分析。采用酚試劑法以牛血清白蛋白(BSA)作為上層清液的蛋白質(zhì)濃度的一個標(biāo)準(zhǔn)。采用試劑盒測定腎組織中GSH-Px和SOD的活性以及MDA的

6、含量。
　　 3.7、測定細(xì)胞凋亡。
　　 采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）檢測細(xì)胞凋亡。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理和分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±SD）表示，其中多樣本比較采用單因素方差分析，兩樣本比較采用Student-Newman-Keu

7、lsq檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果:
　　 1、丹參注射液的高效液相色譜成分分析。
　　 丹參注射液的三種主要成分得到量化結(jié)果。其中丹參素、原兒茶醛和丹酚酸B的實(shí)際濃度的分別為2.15、0.44和1.01 mg/mL。
　　 2、丹參注射液對小鼠體重和腎臟系數(shù)的影響。
　　 鉛模型組的小鼠體重增加明顯低于正常對照組(P＜0.05)。而丹參低劑量組和丹參高劑量組小鼠的體重與正常對照組相比無顯著差異。鉛模型組小

8、鼠的腎臟系數(shù)明顯高于正常對照組(P＜0.05)。與鉛模型組相比，丹參治療組小鼠的腎臟系數(shù)明顯下降(P＜0.05)。
　　 3、丹參注射液對小鼠血鉛濃度和腎臟鉛濃度的影響。
　　 小鼠腹腔注射醋酸鉛可導(dǎo)致血鉛濃度的大幅增加。與鉛模型組相比，丹參高劑量組和丹參低劑量組血鉛濃度無顯著差異。同時(shí)可見，小鼠腹腔注射醋酸鉛也會導(dǎo)致腎臟鉛水平增高，而丹參注射液可以明顯降低腎臟鉛水平（P＜0.01）。
　　 4、組織形態(tài)學(xué)變化。

9、
　　 正常對照組小鼠的腎臟切片染色不表達(dá)任何形態(tài)變化。相比之下，鉛模型組小鼠顯示了腎皮質(zhì)有顯著的組織學(xué)改變，出現(xiàn)明顯腫脹的腎近曲小管上皮細(xì)胞以及腎小球的減少。丹參低劑量和丹參高劑量治療的小鼠與鉛模型組相比，表現(xiàn)出腎近曲小管上皮細(xì)胞增大而腎小球的結(jié)構(gòu)正常。
　　 5、丹參注射液對小鼠血清BUN和CR的影響。
　　 與正常對照組小鼠相比，鉛模型組小鼠BUN和CR水平明顯升高(P＜0.01)。然而，丹參治療組BUN和

10、CR比鉛模型組明顯降低(P＜0.01)。
　　 6、丹參注射液對小鼠腎GSH-Px、SOD活性和MDA含量的影響
　　 與正常對照組相比，鉛模型組GSH-Px、SOD活性顯著降低(P＜0.01)，而丹參低劑量組和丹參高劑量組的小鼠僅表現(xiàn)出輕微的下降(P＜0.01)。鉛模型組MDA濃度比正常對照組顯著增高(P＜0.01)，丹參低劑量組和丹參高劑量組MDA的濃度比鉛模型組明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。
　　

11、 7、丹參注射液對腎細(xì)胞凋亡的影響。
　　 在正常對照組的小鼠腎管狀細(xì)胞凋亡程度維持在一個恒定的較低水平，而鉛模型組的小鼠中腎管狀細(xì)胞TUNEL陽性率明顯增高。丹參治療組與鉛模型組相比，TUNEL陽性的腎管狀細(xì)胞數(shù)量明顯降低，提示丹參注射液顯著地抑制了腎細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論:上述研究表明，對鉛中毒引起的小鼠腎臟損傷，丹參注射液能明顯降低腎臟系數(shù)、恢復(fù)異常的腎功能和改善病理變化，其機(jī)制與減少鉛在腎臟蓄積，抑制脂質(zhì)過氧化和